关于mES N2B27 feeder-free serum-free培养

zpzp0312

回复 vegetax4132 的帖子6 Q' \  n4 H' v

% w0 s  e( n: x3 u2 U我回帖的主要意思是matrigel不一定适合细胞贴壁
8 l! J- C# i" n4 t2 e! x虽然有这样的报道
; _& K6 f& d/ t4 D+ _! |% e: C/ }6 k毕竟matrigel比较贵，如果有其他解决方法就没必要花那么多钱买matrigel去试验

wbj1983

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* ^% Q& Z( I3 `+ g$ g# f' p' ~8 z8 x/ ~" E" y) X$ k0 E; ]
“N2B27+LIF+2I+β-巯基乙醇+Glutamax+双抗”这个培养基是没问题，试着可以加一下NEAA，我是这么做的。还有培养皿一定选择贴壁效果最好的那种corning的（这也是我自己用的）。铺0.1%的明胶37℃20-30min，我们培养的贴壁效果挺好，根本不用需要matrigel，matrigel相对来说还是很贵的。还有希望您尽量用进口的ES medium所有组分，国产的在这方面还是欠佳（不过我觉得您也肯定用的进口的）。还有，您冻存ES的时候可以用90%FBS+10%DMSO效果可能会好一些。纯属个人建议，我是这么做的效果不错，来这儿和大家分享一下，希望对你们的实验有所帮助！

vegetax4132

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% P0 O% x5 o2 R) R! C* m0 s# {- @/ C$ L; @
十分感谢，我最近也把NEAA加上了，我发现用100%的FBS包被板子效果很好。

坏蛋蛋阿布

用无血清培养加血清铺皿会不会有很多血清中不知明的东西上去了，有没有试过gelatin铺皿过夜

sunnyhuan0629

如果真的是feeder-free的培养的话，建议先铺一层matrigel的，这样克隆团才会贴壁生长。另外，培养基的话，我们使用mTeSR1和PSGro都没有问题的啊~

labghost

回复 zmm 的帖子, Q2 }8 s( v0 ?& q
. R& I6 B: A# w' t( M: m
这血清有没有谁试过用HSA代替呢？