关于mES N2B27 feeder-free serum-free培养

vegetax4132

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3 o& m8 [* l' `
最近想建立mES的 feeder-free serum-free的培养体系+ F* ^2 ?& d) Q7 k, T% O
结果发现细胞传入N2B27培养基中大量不贴壁。但克隆球都是活的，再移到feeder上也都能长起来。
+ _; K' ]$ e1 q9 w4 i: E( P8 ?4 J大家有遇到过这种问题吗？
  q, Y" e  M! ?+ w/ ?) V, `3 `
0 U8 E. Y0 ]3 [1 l! {/ j" f我用的培养基:
' |0 _0 n: W4 E( x& zN2B27+LIF+2I+β-巯基乙醇+Glutamax+双抗      6 {6 H3 K7 ]6 u# P3 [
看YING QL 06年的那篇protocol中没加非必须氨基酸和丙酮酸钠，我也就没加。$ T' B1 g% [4 N, [/ @' c
6 Y7 o8 U7 J7 b5 {3 M
在N2B27中， 图中圆圆的小球基本都没贴壁：1 t4 s7 h  t& y; Z1 a6 X3 j9 G

2012-8-8 21:45 上传

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将图中小球移入feeder  血清中，就都贴壁了：. I8 O' M  t4 k

2012-8-8 21:41 上传

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vegetax4132

回复 zmm 的帖子
, D8 A: ]) a* N
% ?" r' D$ `9 m7 F4 p基质？  是什么啊？   

vegetax4132

回复 frankieisme 的帖子. P( l( A% @" I- u
) o/ o. H6 \) ^$ f+ ?
哦      是一种比明胶更好的胶吧？   听说过   4℃铺  37℃会凝固   是这种吗？

vegetax4132

回复 zmm 的帖子7 j8 P0 E9 P" A( b. q/ e6 f0 R
/ [, B9 [- i; G% `' }2 G/ d: v
我是铺了明胶的，
! ^' e) S3 F4 r' H最近听说再铺一层血清就能贴壁了，试了下真的基本都贴了，不过这样克隆长的很慢了。好几天天都不见长大。。。

vegetax4132

回复 zpzp0312 的帖子
$ \  z4 R5 L2 E: x+ u2 G/ q# }* C1 _4 {* w9 ^1 o' h& j
谢谢，    不过ESGRO也是一种类似N2B27的培养基吗？      
( T, f- n; q" P' D" {1 ^; D- H5 B% T. L我用N2B27+LIF 加上feeder，  发现克隆形态不好，feeder有大量死亡   

vegetax4132

回复 wbj1983 的帖子+ G0 P) N6 A- A/ h* ?+ i$ _8 |6 J$ c

$ H, y2 j! a  m0 ]6 H+ l, u* \7 ]9 {/ T十分感谢，我最近也把NEAA加上了，我发现用100%的FBS包被板子效果很好。