关于mES N2B27 feeder-free serum-free培养

vegetax4132

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最近想建立mES的 feeder-free serum-free的培养体系
( T6 W- ^- h1 u0 G# I% g) S" z结果发现细胞传入N2B27培养基中大量不贴壁。但克隆球都是活的，再移到feeder上也都能长起来。9 m- q0 U" [& C7 V! P$ R( U
大家有遇到过这种问题吗？* |+ Z! h! G* g% @$ D
: h) V4 F, y6 p
我用的培养基:# @* ~% E& U- m- {  |7 S7 y
N2B27+LIF+2I+β-巯基乙醇+Glutamax+双抗      $ i! N6 o. E; f7 T, a( g4 L, P
看YING QL 06年的那篇protocol中没加非必须氨基酸和丙酮酸钠，我也就没加。
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在N2B27中， 图中圆圆的小球基本都没贴壁：2 D. J: O4 p7 P, j8 X

2012-8-8 21:45 上传

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将图中小球移入feeder  血清中，就都贴壁了：7 _; Q' v+ l9 d  [! b

2012-8-8 21:41 上传

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vegetax4132

回复 zmm 的帖子$ p  T, L' e7 C" l9 Y1 Z
8 G1 V% {4 y9 ?( I$ i3 ]# }. v
基质？  是什么啊？   

vegetax4132

回复 frankieisme 的帖子& E# g8 U0 ]6 p; A& G. y7 u3 \
0 b  c# S  H0 Z6 _
哦      是一种比明胶更好的胶吧？   听说过   4℃铺  37℃会凝固   是这种吗？

vegetax4132

回复 zmm 的帖子
7 a2 U& m8 m+ m* u' E3 U! \7 A- V2 x/ Z) D' ]7 [" \  N* i
我是铺了明胶的，
0 s8 Q6 B; o4 Q最近听说再铺一层血清就能贴壁了，试了下真的基本都贴了，不过这样克隆长的很慢了。好几天天都不见长大。。。

vegetax4132

回复 zpzp0312 的帖子
8 e2 p  ], p8 S4 Q+ u; y8 E1 k6 }" X! R6 H  L- Y/ L5 h( o
谢谢，    不过ESGRO也是一种类似N2B27的培养基吗？      1 S2 ^; C( |  J
我用N2B27+LIF 加上feeder，  发现克隆形态不好，feeder有大量死亡   

vegetax4132

回复 wbj1983 的帖子
1 W: q: I/ d. a- R# V/ N4 h: G2 s7 p( E
十分感谢，我最近也把NEAA加上了，我发现用100%的FBS包被板子效果很好。