请教一下大家都是怎么鉴定mES的

vegetax4132

最近刚拿到了几株新分出来的mES，老板让先鉴定一下。
# l' S8 t# d0 D5 P  ~; D  U# n目前我想从3个方面入手：
$ H2 N: b" w9 G2 I2 Y5 w/ Z; B1.QPCR看下干性基因和分化基因。
: H5 W* `9 P' s. Y5 U! E( f* [2.给克隆染下干性基因的免疫荧光。
+ A: X# B- q; x( `, a3.悬EB做下切片染色。5 T6 ?5 k; }0 q
8 R' M% ]& |$ u2 e
在这请教下各位战友都是怎么做的？ 还有在鉴定的过程中有什么需要注意的吗？

chenks

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( {) @; S% [9 A" G' `
0 H# a& L. m' x. H+ x" h鉴定包括多能性基因的RNA和蛋白水平的检测(QPCR和IF) ;核型鉴定; 多能性基因启动子的甲基化修饰;传代分析(是否能稳定自我更新); 嵌合鼠(将细胞注射到小鼠囊胚内细胞团中,再移植回母体,观察后代小鼠,最后回交,观察能否生殖传递); 四倍体互补(这个比较复杂,你可以上网搜索一下)

细胞海洋

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7 M; f. }0 x: y( z( E* b! H  q
5 N: H2 K* U3 C1 Y你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
& Z! ~6 l, `. v5 J$ t
( N# W' P# M# U5 e否则他会看不到

smallbite

能否解释一下2N嵌合体和四倍体补偿实验，谢了！

wbj1983

回复 vegetax4132 的帖子( `& U3 T% ]7 }0 f% D# ]# s+ t
. H& V4 ]0 r  }. |& l& J
1、QPCR可以检测一下OCT4、Nanog、sox2等干性基因表达情况，相对比较简单。' M5 ~  y8 s: W" s4 _: y5 u
2、关于免疫荧光，可以染色OCT4、sox2、nanog、SSEA1等，也可以用western blot检测。
# i" m+ o3 [! A) l4 A3、EB切片染色可以染色D-SMA: alpha smooth muscle actin; vWF: von Willebrand Factor; GFAP: glial fibrillary acidic protein; AFP: alpha-fetoprotein。
* u. V+ s* H4 y2 C) j: G& O7 x3 Y7 I4、还可以在体内分化做畸胎瘤实验，然后切片染色HE。
8 i4 u% f9 O* I! ]5、还可做2N嵌合体和四倍体补偿实验。

wwwsdzsgov

严格的话，RNA水平，蛋白水平，体外分化，体内分化，嵌合动物都做就行了。