请教一下大家都是怎么鉴定mES的

vegetax4132

最近刚拿到了几株新分出来的mES，老板让先鉴定一下。
% i  T- K/ K7 D- k. D3 ?目前我想从3个方面入手：# k. g8 H0 w& j3 M/ p
1.QPCR看下干性基因和分化基因。
8 v/ `; ^  L1 r1 B* F2.给克隆染下干性基因的免疫荧光。
( l- p3 G) c& p: r* ~' S1 y3.悬EB做下切片染色。2 m, B' {" N2 o3 U
2 O+ f6 ~" y6 a& \) c8 y* p
在这请教下各位战友都是怎么做的？ 还有在鉴定的过程中有什么需要注意的吗？

wwwsdzsgov

严格的话，RNA水平，蛋白水平，体外分化，体内分化，嵌合动物都做就行了。

wbj1983

回复 vegetax4132 的帖子' S* T) V0 f/ K" P; Q& r' ?: {  j
) D0 z6 D& q! _1 r( e
1、QPCR可以检测一下OCT4、Nanog、sox2等干性基因表达情况，相对比较简单。
9 j: G9 c: d  ~3 f' d3 B4 C2、关于免疫荧光，可以染色OCT4、sox2、nanog、SSEA1等，也可以用western blot检测。
7 H  U$ D4 J" i! D; R- s! h( o3、EB切片染色可以染色D-SMA: alpha smooth muscle actin; vWF: von Willebrand Factor; GFAP: glial fibrillary acidic protein; AFP: alpha-fetoprotein。0 I/ F  ~9 L6 k+ t3 u3 \' N( G
4、还可以在体内分化做畸胎瘤实验，然后切片染色HE。
" ^* }' Z1 Q  _. b9 t6 I* [% z5 u' P5、还可做2N嵌合体和四倍体补偿实验。

smallbite

能否解释一下2N嵌合体和四倍体补偿实验，谢了！

细胞海洋

回复 smallbite 的帖子# r& B, a. U& R

& y3 C5 W" J8 ~; m3 [2 ~  o你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
9 ^7 s. e3 Y+ g# r; l6 e7 u9 T: X$ p+ p
否则他会看不到

chenks

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! m, o+ b8 @0 I- p0 Q; I$ c: ~- `5 c3 b# x: u. L- ]
鉴定包括多能性基因的RNA和蛋白水平的检测(QPCR和IF) ;核型鉴定; 多能性基因启动子的甲基化修饰;传代分析(是否能稳定自我更新); 嵌合鼠(将细胞注射到小鼠囊胚内细胞团中,再移植回母体,观察后代小鼠,最后回交,观察能否生殖传递); 四倍体互补(这个比较复杂,你可以上网搜索一下)