脐血MSC混合的杂细胞——破骨样细胞？

huajie881026

第一次和第二次分离脐血原代MSC均未见到梭型细胞，除了脐血量不足未找到其他失败原因，故摸索着做额第三次。第三次脐血原代至今刚好十天，培养瓶中可见到一定量的梭型细胞，考虑可能为MSC，但未形成cluster，故还不明确。但是有种杂细胞很多，也贴壁，看着似乎会影响MSC的扩增。请教：这就是所谓的破骨样细胞吗？为何也在淋巴细胞层？做原代的时候有什么方法能将这种杂细胞减到最少呢？/ C7 L, B$ L  N; `- S6 T: y7 o3 p3 m
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huajie881026

小猪快跑 发表于 2012-8-13 16:46
1 ~8 D7 \( Z+ }$ n! U. w你是说视野中间那些超大个的细胞吗？

8 O+ v8 R* N% P# U/ Q对的

huajie881026

pailishi 发表于 2012-8-14 08:41 # w9 {1 @$ N3 @* I+ ]
你这应该不对，我们一般7天左右就长MSC克隆了，而且增殖很快的

) b- C% o! Z5 i我也知道一般1周左右就形成克隆集落了，但是细胞的确在增殖，只是速度比较慢，而且我觉得上图中的杂细胞会不会占空间，不利于MSC的增殖？

huajie881026

回复 小猪快跑 的帖子! ]+ {% h+ Z& Y. c2 e0 y

# ]( E& c. E7 l5 N5 L$ d我上个图吧，这种细胞依然存在( C) {! l, B9 f; i+ D% b

- {/ C% [" S, ~0 y细细看来这周围的成纤维状细胞貌似不是MSC，破骨样细胞并没有挤着成纤维状细胞，但他们却没有形成集落。1 [! ~; G6 h1 |+ S. u/ Y
另一瓶里面就有细胞集落
; h; l6 W' ~* C$ Y" e3 ^# o+ v; D, T6 Z
唉 这种圆圆的细胞真不知如何是好

huajie881026

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" i& z# {7 Y  ~
5 C# ?/ l+ M% B/ F& L2 R你这杂细胞看上去比我的杂细胞小多了，我的真的是非常之大！

huajie881026

回复 fay898 的帖子' T' b# M9 o  m& b. S
9 l) O, N0 n1 ?9 A) h. |
按2* 106/cm2铺皿
* b  Z" ~+ V8 J

huajie881026

回复 xuzhijuan1989 的帖子4 Z5 K8 d: r! Y; f$ k

& i4 X: f1 C4 J! I. u2 `CB-MSCs我养了10多次才成功过一次，CB里面MSCs含量的确比较低的，最近在努力寻找提高成功率的方法。。。。4 R7 H6 O; O, z0 H* ]

huajie881026

回复 xuzhijuan1989 的帖子
: _5 z. S  N+ S! J
4 W7 Q3 X3 v- F1 z) `5 [/ U我养了10份也才成功一份，你可以试试免疫磁珠分选，或者加一些LIL-3、GM-CSF、氢化可的松、bFGF等试试再摸摸条件，一直那种条件养几十份标本太浪费了，我做了十份才成功一份就开始找原因了。。。多看看脐血的别人的文献，看条件是否和你一样，自己能否改进。。。