新手求助，慢病毒转染是有荧光，病毒浓缩后做滴度实验没有荧光

sirius_zou

本人新手，向各位求教。+ K) L0 a) r# Y
慢病毒在293T包装48h, 72h后都可见荧光，收集培养液经过滤、离心浓缩后，再感染293T做滴度实验，为神马就没有荧光了。
: ?: F2 ^$ y" Z8 d* p! U3 N, [助转剂也加了的，是否是因为293T老化？用的是14代左右的293T做滴度实验

sirius_zou

biowit 发表于 2012-8-15 10:35
0 ?; z% g0 i3 S2 V细胞状态会影响滴度测定，必须保证细胞的状态良好，增殖快速。需要排除几方面
2 E# _4 d/ d& r% l4 w  W细胞状态，
8 N2 k: o8 I3 K! a4 P" u& c& a1 A( r4 b离心浓缩病毒的 ...

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收集包装后48h和72h培养液，离心，取上清经0.45um过滤去细胞碎片，25000r/min 10℃离心2h，用pbs按离心前体积浓缩100倍得到病毒液，然后病毒液再稀释5-20倍用于滴度实验
' X9 f# f# W! _  E/ r) \" A不知各位的步骤怎样？3 X" A5 e4 g/ s. J  S8 A

4 H* S. @# Y3 ]2 v) ?补充内容 (2012-8-15 11:20):8 a# b. i, E, r! N7 D7 Q2 S
293T增值速度的话，200+w细胞接种至9cm皿，3天基本长满