大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化细胞层剥落

sunxiaoyi

诱导3天' t6 V8 Y. p0 L
诱导前
/ j' F$ S! M! f成骨诱导3天后的照片，再诱导下去到第七天的时候细胞就掉下来了，细胞数变多，并没有见到细胞形态变成鹅卵石样。不知道同志们成骨诱导什么时候能见到形态发生明显的变化了？& q$ @# B4 j( H/ a) C- \6 b, Q6 ?

4 |$ v( s: F  C, A& C3 p! u$ `最近刚开始接触MSC，做大鼠MSC成骨分化的时候遇到了麻烦，用2-3代MSC100000个接种到3cm培养皿中，第二天开始诱导（10-8mol/L地塞米松，50ug/ml维生素C，10mmol/Lbeta甘油磷酸钠，10%FBS），每三天换一次液，到了第5-6天细胞长得已经很满，镜下观察没有明显的多边形细胞产生，仍然为长梭状形态。第7天细胞层整个卷起来，脱落下来了。本来打算诱导2-3周做染色的，现在也做不成了。另外，在24孔板（种板密度5*104/孔）里也发生了一样的情况，不知道哪里出了什么问题？
) m. u  U. Y2 j6 @& N$ n1 T6 [( B, \问题可能很弱智，请高手指点。感激不尽！! S- Z; n! _2 O4 d: r

2 k( Y2 @; H7 @- M/ _

小猪快跑

没见过，关注！

sunxiaoyi

自己顶，是不是细胞的问题，老化了？

huajie881026

没铺明胶吧，我也碰到过这个问题

yedanna

我用的细胞密度是5000 cells/cm2 ，明胶包被过的6孔皿，液体由10% FBS，50 μM ascorbic acid, 100 nM dexamethasone 和 5 mM KH2PO4组成，第一天就用此液体诱导，隔天换液，诱导21天。细胞一直在增值，出现明显细胞形态变化大概在1星期以后，如果细胞密度太大，这个变化很难观察到。+ r) Z6 g; m( j7 d# L
LZ出现的细胞脱落是不是因为细胞密度太大了？

yanzhaoii

细胞密度太大了，有两个解决方法：一，铺板前明胶包被；二，种植细胞数减少，12孔板在2万左右，6孔板在4-5万左右

cmw930922

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我想问问，你的成骨诱导液是自己配的还是买成品的？