人间充质干细胞成骨分化细胞死的厉害，什么原因呢？

独孤风云

正在做人间充质干细胞成骨分化诱导，4天左右就死光了，大家之前有没有遇到过，帮忙看看是什么原因？另外想要一支人的间充质干细胞，大家谁能帮下忙，或者推荐购买的地方也行，新手，完全的菜鸟一些，向大家求助！我的手机13654370281，Email：liuzw1117@gmail.com

独孤风云

回复 飞翔的十字架 的帖子
7 c1 j7 `% G8 }
4 h* V% ~! d) ^6 D, u. [/ G6 o确实很简单明了，之前能做出来的，后来复苏的细胞就不行了，用的是一种上皮细胞来源的IPS细胞，代数多了也死的严重

独孤风云

回复 飞翔的十字架 的帖子& x9 C5 U! i9 c/ \. x! _
0 h2 D' Q# D* H! w
确实很简单明了，之前能做出来的，后来复苏的细胞就不行了，用的是一种上皮细胞来源的IPS细胞，代数多了也死的严重

独孤风云

回复 飞翔的十字架 的帖子5 }# z& B! a' L; K' K5 N  r) }

& b8 |4 d% I" n! S* q确实很简单明了，之前能做出来的，后来复苏的细胞就不行了，用的是一种上皮细胞来源的IPS细胞，代数多了也死的严重

独孤风云

回复 huajie881026 的帖子
- o" g1 X7 L3 P
; f, e8 D% F4 t7 |1 X自己没有这个细胞呀，之前用的是一种IPS细胞，刚开始诱导没有问题，但后来复苏后的细胞一诱导就死

独孤风云

回复 漂泊的风 的帖子* a9 S. w! Z  x+ |& {
) I2 [' p! E0 O; f0 n
好的，你们用的是哪个公司的？方便告诉一下货号吗？谢谢

独孤风云

回复 细胞海洋 的帖子) W5 I2 l& x1 m) I; U" v/ n) ?
6 d- r0 w4 e5 i( E4 h
我没有hMSC, 用的是国外实验室馈赠的转化的人乳腺上皮细胞，他们转入大T抗原，端粒酶催化亚基和Twist基因，使细胞拥有了干细胞特性，之前用自己配制的诱导培养基（加入地米，Vc和beta甘油磷酸纳）诱导成功过几次，养到最后细胞也都死的严重，所以重新复苏，不过重新复苏的细胞就不行了，诱导第4天左右就开始挂掉了

独孤风云

回复 katysong 的帖子. m/ E7 C+ M% c& z( S: Z
1 B/ a, }; p- @; J0 k! K
非常感谢，对了你们实验室的hMSC是买的吗

katysong

我们实验室的摸索条件如下，仅供参考：0 ^3 d7 z2 F/ y  y6 F7 |. Y+ L
（1）消化处于对数生长期的hMSCs细胞，计数并按5*103/cm2接种到12孔板[接种浓度太大也会引起细胞间的接触抑制]，每孔的培养体积为1.5ml（干细胞培养基），待细胞生长24h后换成BDM（成骨分化培养基，加入b-磷酸甘油钠、抗坏血酸和地塞米松三种化学因子）诱导，每隔3-4天换液1次；
' k- [3 h% D0 E（2）hMSCs的成骨分化周期较长，一般需要14-28天；随时间延长，用茜素红S染色（一般用于分化晚期鉴定）可看到越来越多的钙离子沉积；
& b4 y. n5 Y( }% {$ v（3）同时，不同浓度的FBS也会对其增殖能力有影响，1-10%的FBS，以10%的效果比较好一些；7 s, t( _8 W- `) R) B8 L2 j
（4）也可加入一定量的EGF诱导其分化，不同尝试的0.1、1、10、100ng/ml EGF，以10ng/ml的EGF效果最好，可协同促进其分化；
( C$ a  U1 D/ k4 {: Z( u祝好运！
: e, }5 s  ]$ J) n& |1 I% D- G8 S1 z  |" a

漂泊的风

买成骨诱导液吧，诱导效果很好的，比自己配置的效果好多了。