人间充质干细胞成骨分化细胞死的厉害，什么原因呢？

独孤风云

正在做人间充质干细胞成骨分化诱导，4天左右就死光了，大家之前有没有遇到过，帮忙看看是什么原因？另外想要一支人的间充质干细胞，大家谁能帮下忙，或者推荐购买的地方也行，新手，完全的菜鸟一些，向大家求助！我的手机13654370281，Email：liuzw1117@gmail.com

细胞海洋

请说明试验方法 建议上传图片

飞翔的十字架

成骨分化protocal很简单明了的，搜一下帖子，先看看个试验步骤有无问题，试剂有无问题，还有细胞状态，或重复实验

huajie881026

cyagen有专门的细胞株卖，不过很贵。1×10*6大概几千块钱，还是自己养的好吧，就花点时间

小猪快跑

怎么会死了呢？不可能吧？是不是染菌了你没发现啊？还有操作步骤怎么样的呢？

漂泊的风

买成骨诱导液吧，诱导效果很好的，比自己配置的效果好多了。

katysong

我们实验室的摸索条件如下，仅供参考：! Y: q6 q" ?& Y( B
（1）消化处于对数生长期的hMSCs细胞，计数并按5*103/cm2接种到12孔板[接种浓度太大也会引起细胞间的接触抑制]，每孔的培养体积为1.5ml（干细胞培养基），待细胞生长24h后换成BDM（成骨分化培养基，加入b-磷酸甘油钠、抗坏血酸和地塞米松三种化学因子）诱导，每隔3-4天换液1次；5 I8 B! `3 w6 X, [+ d3 B
（2）hMSCs的成骨分化周期较长，一般需要14-28天；随时间延长，用茜素红S染色（一般用于分化晚期鉴定）可看到越来越多的钙离子沉积；
* n, f7 \. m# u/ k  K& J; r7 @（3）同时，不同浓度的FBS也会对其增殖能力有影响，1-10%的FBS，以10%的效果比较好一些；9 }! U$ t3 ^9 ?2 c
（4）也可加入一定量的EGF诱导其分化，不同尝试的0.1、1、10、100ng/ml EGF，以10ng/ml的EGF效果最好，可协同促进其分化；: X- R" V3 O: ~- G" H9 u0 R; u
祝好运！2 ~" j% [0 Y1 @4 p5 i; U

  N4 r; x6 `1 N; P* L+ a

独孤风云

回复 katysong 的帖子
$ H5 F# R2 G6 \! \# X) X
$ l4 O( D+ ^( m  \非常感谢，对了你们实验室的hMSC是买的吗

独孤风云

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- m/ n0 ?3 Z/ O7 e
/ h$ _  k6 ]! W8 ]- J) j我没有hMSC, 用的是国外实验室馈赠的转化的人乳腺上皮细胞，他们转入大T抗原，端粒酶催化亚基和Twist基因，使细胞拥有了干细胞特性，之前用自己配制的诱导培养基（加入地米，Vc和beta甘油磷酸纳）诱导成功过几次，养到最后细胞也都死的严重，所以重新复苏，不过重新复苏的细胞就不行了，诱导第4天左右就开始挂掉了

独孤风云

回复 漂泊的风 的帖子1 v/ ~# ^, ~5 @! n4 \
, |+ V  h2 T0 W& ~0 L- F
好的，你们用的是哪个公司的？方便告诉一下货号吗？谢谢