天狼星红-苦味酸染色

songyang1987

我想请教一下 天狼星红-苦味酸染色的具体流程，天狼星红有的文献用的是0.5% 有的用的是1%的 两个浓度使用时有区别吗？天狼星红溶液是用水配制 还是酒精呢？此过程染细胞核用苏木精可以吗？ 还望各位不吝赐教！！！

songyang1987

更正： 天狼星红浓度是0.5%和0.1%

crystal_xjw

上楼说的对，是0.5%和0.1%。6 E# I# ~0 |( b1 C! x. k
2 Q$ C1 v3 G: H  c+ C, o1 c
已知胶原有四型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）区分并定量这四种胶原纤维，对于研究病变的发生机理和演变过程有一定的意义。利用胶原蛋白聚合及其缠绕螺旋排列不同的特点，使用天狼星红苦味酸染色法，在偏振光显微镜下，可以根据双折光性和着色的不同，分别显示出四型胶原纤维。. L7 }' U9 h' s9 Z
[组织固定与切片]
( ^7 b# C) A$ ~( l9 l$ k4%甲醛液固定组织，石蜡切片。
  K2 q2 X) t1 X7 q& R. V[试剂配制]5 d. m, [) k) t9 G- o7 M( |$ w) c
（1）  天狼星红-饱和苦味酸液：0.5%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液90ml。9 n2 ]. C- K/ X4 X# @
（2）  天青石蓝液：天青石蓝B1.25g，铁明矾1.25g，蒸馏水250ml。溶解煮沸，冷却后过滤，加入甘油30ml，然后再加入浓硫酸0.5ml（注意硫酸一定要后加入）。$ L) x# T# S1 }6 [
[操作步骤]
' w! X( H9 d! `) |7 l/ }" V（1）  石蜡切片厚4~6µm，脱蜡至水。
- C+ N5 E' V$ D3 j" \（2）  入天青石蓝液5~10min。
% T& Q  R9 }1 J( F5 K（3）  蒸馏水冲洗3次。' {; ~$ @# L5 W& G# U4 G( m
（4）  天狼星红饱和苦味酸液15~30min；（可用Harris苏木素液淡染细胞核）。8 Z+ U% v3 f9 A7 s# F
（5）  直接用无水乙醇分化与脱水。4 G' a3 y9 S: V
（6）  二甲苯透明、光学树胶封固。3 h5 c# @+ f7 G/ `6 g. ?. h" z* H
[染色结果]
& j0 |( |- Q9 Y2 t( T8 S+ ?- E/ R- ^' Y普通光镜观察：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其他成分呈黄色。; W5 x+ r! r. S) H* v  K
偏振光显微镜下观察：
% Z  G0 ?8 I/ l) [& p; G, V8 rⅠ型胶原纤维：红色或黄色，排列紧密，具强双折光性。
. q8 P1 e/ L! p$ V2 TⅡ型胶原纤维：多种色彩，疏松网状、弱双折光性。
+ A( ~' @- |3 `& ]Ⅲ型胶原纤维：绿色、细纤维、弱双折光性。$ N) J4 V) `. E) Q% s: e, k) R
Ⅳ型胶原纤维：淡黄色、弱双折光性（基膜成分）。$ X7 P  Q. ^" ]
[注意事项]
' S; o) @1 ]( i3 i为保持色彩鲜艳，应在染色后及时观察并照相。% j$ b* o  ?! S1 Y0 Z  [1 [3 }* w
& T5 k( F- V, _5 T" y. Z! s  N
这是我在教材上找到的，希望能帮到你。

songyang1987

谢谢楼上 天青石蓝液和Harris苏木素都是染细胞核的吧 那可以直接用苏木素不用天青石蓝液吗？5 c* \* M. a! F4 G+ q% r, Y+ f
0.5%的天狼星红 是用ddH2O配吗