ficoll淋巴分离液分析骨髓间充质干细胞

bsx1111

看图感觉你的骨髓细胞量太小了，细胞肯定要少，建议你用直径小一点的离心管试一试，再有离心机要用带缓降功能的，降速太快，层容易散。

wangzhiqi86

回复 qiugt0819 的帖子( ^; h4 O: a+ G/ q- g$ h- Z
) c3 [, ^+ j$ e; I% b
稀释液是怎么加到Ficoll里面的？
6 W0 @7 b  r/ m2 S6 d! f单核细胞当然应该很多，换液后就可以发现MSC可以贴壁，其他细胞会被换掉，过几天就看到了

qiugt0819

回复 wangzhiqi86 的帖子' f) a+ r1 b% r
( g4 [0 B& H# V3 _5 r0 L  _7 ]$ c
谢谢，第一次发帖，图片前面的文字没有显示，操作过程：小型猪骨髓&DMEM稀释液和分离液按1:1，转速3000R15min就出现图片的结果了，但是就没有明显的白膜层，不知3000R15min是否需要改进，细胞计数的图片没有保留，你的意思是单核细胞应该很多吗，那MSC形态与其他单核细胞一般怎样辨认呢？

qiugt0819

回复 小猪快跑 的帖子
3 `* G( S7 r7 G" I$ e1 M$ l4 t: ^# f% P( }( `& N
谢谢，第一次发帖，图片前面的文字没有显示，操作过程：小型猪骨髓&DMEM稀释液和分离液按1:1，转速3000R15min就出现图片的结果了，但是就没有明显的白膜层，不知3000R15min是否需要改进，800转5min是想洗一遍细胞用的

qiugt0819

回复 katysong 的帖子
- J7 g; R  K8 C$ q5 \' u/ X4 ?" s. c; v
谢谢，第一次发帖，图片前面的文字没有显示，操作过程：小型猪骨髓&DMEM稀释液和分离液按1:1，转速3000R15min就出现图片的结果了，但是就没有明显的白膜层，不知3000R15min是否需要改进

小猪快跑

转速太小，本来细胞量就少，转速还那么小，平时消化细胞离心的时候还得1200呢，淋巴分离怎么也得2000转吧！

wangzhiqi86

你计数发现视野只有50个肯定不正常，因为MSC占单核细胞的比例只有百万分之一，也就是说如果抽到的是白色层单核细胞，应该整个视野下面都是小的细胞，不知道你有没有这个照片。, K4 a, `* `" [3 S$ }
还有，你把骨髓冲出来的悬浮液加到ficoll里面，有没有具体的操作步骤，不然只给一张图片不能说明问题。
% I8 m/ F$ j4 H! d: M/ A上面的培养基颜色很红，不知道为何？我当时上面只有单单的红色，中间的白色层在轻轻晃动离心管后，明显随着一起摇动。

katysong

初步感觉应该是离心转数太小了，一般是2000rpm/20min/25度；而且一定要用慢升慢降的离心机；一般都能做得出来的，祝好运！0 Y) i* q) T1 m$ I; B" X