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- 积分
- 9
- 威望
- 9
- 包包
- 94
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1、标本是乳腺癌组织白片
5 g- i, @1 A, _' v+ y5 N7 |! c/ ^; F; i+ d r8 \& Q
2、60℃考2小时。
' a5 [6 g( H1 {+ E# S5 }# d3、二甲苯三缸Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、脱蜡，各10分钟。
+ s* z: J2 r @, @4、无水乙醇两缸，各 2分钟；& c0 X, ^! w6 x! E- b
5、95%酒精二缸，各 2分钟；
; a# v) @$ M2 }5 O$ J! }6、自来水流水冲洗2分钟；7 m6 `7 s9 e$ a( q! w' j
7、PBS冲洗2分钟；
. c5 n: j1 E9 d8、将已冲洗干净组织放入高压锅内，加入约2000ml左右柠檬酸盐的抗原修复液（pH6.0）盖好高压盖检查安全筏，沸腾喷气1.5分钟。
i% B+ j: P* A C4 e9、自然冷却移至蒸馏水中浸泡2分钟。' M9 s% n( z- N, X
10、3%H2O2中浸泡10分钟，蒸馏水冲洗3min×3次。7 T! o" U& ~2 j/ V/ y3 I# o
11、取出切片，擦干组织周围的水，用免疫组化油笔画圈笔在组织块周围画一圆圈，
% I8 D' l) ?' V12、PBS缓冲液冲洗。: y. U0 G8 V9 H$ q- t
13、加一抗(CD133)孵育（PBS配制，1：100），将切片放入孵育湿盒中，4℃的恒冰箱中过夜。& z/ n# S9 |1 ~; o
14、用PBS洗3次，每次3分钟。 O2 @8 g* B: @/ e
15、加二抗在组织上、放入37℃恒温箱中孵育30分钟。（兔/鼠通用二抗）
( w4 |5 T3 ^# `9 ~3 ~& D2 S16、用PBS洗3次，每次3分钟。
9 }4 ~% m: O1 P; _+ Y17、DAB显色。
1 F/ k' S' @7 f, I( B4 Z. _18、苏木素染液复染10分钟，
9 \/ c e3 D; _, J; b% s* a& z+ v19、1%盐酸酒精分化3秒钟。
4 k: a3 M W; q' I( ?9 a20、流水冲洗5-10分钟。7 G: X% P k' K7 q, ~5 C
21、95%酒精二缸，各 2分钟 无水乙醇两缸，各 2分钟；) P, t5 { }+ Y% ]
22、二甲苯I、II、Ⅲ，各2分钟23、中性树胶封片+ H& p* A& N: E4 O7 r1 P j. |
结果：我自己觉得CD133是细胞核阳性。不知道是什么原因，帮我在分析一下
8 G: H" _+ p6 P/ N* M这是厂家第二次给我的抗体，第一是细胞核我以为是抗体原因。3 ~% L$ Y( W1 Z
! P2 G( c) s- [) m, f# ?* K# C |
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总评分: 威望 + 2
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发表于 2012-8-30 15:18
发表于 2012-9-3 19:32
