请教专家：hiPS复苏问题。

也行天下

我最近复苏hiPS细胞，复苏后第1天细胞克隆贴壁还很好，细胞状态也不错，而第2天细胞克隆就开始脱落。我想是不是细胞代数太多了，我的细胞传到30多代了。

也行天下

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9 w2 X! Y' m# X7 z$ L# |. L( T+ l# ]$ G! K  F
Thank you!

也行天下

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" {3 e4 F+ K6 o7 `1 Q& y- c8 R3 `! a1 E  N. ^
谢谢！

vae有何不可

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' |6 H; E5 x, _; U. s# L$ F
/ t  |$ m* H4 n) j我感觉任何一种细胞的复苏之后能否很好的贴壁以及较好的传代都与很多因素有关，包括复苏时冻存细胞在水浴锅里的解冻的时间，复苏时培养液的新鲜与否，干细胞还要看下贴壁的饲养层细胞的状态等....个人见解...

lchanlon

回复 也行天下 的帖子. B+ S) W2 L. B1 }
0 ?9 Z, q# P2 O. A" B
Maybe is the problem of your cell stock or something wrong with your cell freezing protocol. I recovery human ips cell from liquid nitrogen with ROCK inhibitor. You know, ROCK inhibitor elevate the efficiecy of live cell, but it promote ips cell differentiation. So i usually remove the ROCK inhibitor 6 hour after cell recovery. Actually, someone removed it 2 hours after seeding. The cells already attached on the plate in 2 hours.

也行天下

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, |8 R8 l( ^' v我们有两次复苏hiPS细胞都没有贴壁，也加ROCK 抑制剂了，和以前复苏的区别就是细胞团块大了些，以为是这个原因呢当时想是不是细胞团块大了影响细胞冻存效果。那就得从其他方面找找原因了！

frankieisme

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& h& i' ^( @1 N2 P9 O3 U
影响不会太大,但复苏后大块细胞很容易自动分化.

pingzongyunlan

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* @* p; s( @5 ^7 `
% ~+ P4 m, U4 ]我好像明白我错在哪里了，谢谢撒！

pingzongyunlan

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2 O( j- C. k* z3 I
3 V& R  [# M3 a! U' y6 X我没加ROCK抑制剂，只是用之前用的培养液，也是feeder-free，我得试试你们的方法~谢谢！

也行天下

回复 frankieisme 的帖子7 o) }0 L! M+ s9 R; {* V. E

# ?5 C8 |6 h# f/ E请教一下，冻存时细胞块太大会不会影响复苏效果啊？