现在胰酶消化细胞效果很差，求大侠指导

dc1818

我现在用0.25%的胰酶3ml消化T25的瓶，四分钟的消化效果都不好，吹打也没多大用，不知道哪位大侠有更好的办法吗？

q838903017

培养基会终止胰酶的作用 所以必须用缓冲液洗至少一次，胰酶在37度作用最好，这样一般消化都不会有问题，对于消化的时间  不同的细胞系也不同

yanleijeff

最好用PBS冲洗将培养基冲洗干净，否则培养基中残留的血清会中和胰酶的作用。

lcw918

回复 dc1818 的帖子6 I& P- p+ ~# C4 I

% i$ \3 ], b: b6 c就是这一步，你要洗啊洗啊洗啊洗，不然残留的培养基，里面有血清，会终止胰酶的。洗干净之后再看，会发现好神奇

avacfr

首先，一定要用PBS或者D-Hanks液冲洗两遍，其次加入温的胰酶（可量大一点，晃动覆盖细胞层面然后吸出一部分），消化过程中来回晃动，使胰酶覆盖细胞层，消化会更均匀。个人觉得主要原因是你没有冲洗细胞，仍有培养基（血清）残留中和了胰酶的作用

avacfr

首先，一定要用PBS或者D-Hanks液冲洗两遍，其次加入温的胰酶（可量大一点，晃动覆盖细胞层面然后吸出一部分），消化过程中来回晃动，使胰酶覆盖细胞层，消化会更均匀。个人觉得主要原因是你没有冲洗细胞，仍有培养基（血清）残留中和了胰酶的作用

Donnies

先问一下你的胰酶已经多久了呢，如果很久的话，消化不下来也是正常的，如果是新的胰酶，对其他的细胞消化很好的话，你可以先用胰酶洗一下细胞，然后进行消化，或者直接将培养基吸净之后加入胰酶放入孵箱中，然后进行消化

445334587

洗一遍，去除残余培养液，以免培养液中和酶，

dc1818

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非常感谢你的指导，我现在就是放到培养箱中消化的，效果不错

Donnies

你是直接在室温下消化的还是放到孵箱中，如果一直放在室温下进行消化的话，建议放到孵箱中，在37度的孵箱中有助于消化，一般细胞消化一到两分钟即可，如果你已经放在孵箱中进行消化的是，是不是胰酶放了很久了，或者你加的胰酶太少了，如果还是不行的话，你可以把培养基吸出之后，用胰酶将培养瓶洗一遍之后，再加入胰酶，这样的话，一般都可以达到目的的。