现在胰酶消化细胞效果很差，求大侠指导

dc1818

我现在用0.25%的胰酶3ml消化T25的瓶，四分钟的消化效果都不好，吹打也没多大用，不知道哪位大侠有更好的办法吗？

sdwzg119

胰酶放了多久了？突然出现的情况吗？一般胰酶4℃不能放太久的~
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还有，你培养基洗干净没？没洗干净也消化不动。

dc1818

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胰酶应该在一月之内，培养基就是用移液管吸干净了，没有用生理盐水冲洗

634996425

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: ?# a2 x  V, t7 L8 E我建议您配制TE溶液：0.25%胰酶+0.02%EDTA，不要放到37℃，直接放到室温45min左右即可，操作过程中记得把我好消化时间，胰酶如果每次都预温用不了下次再用一热一冷酶活性会降低的，希望对你有帮助

dc1818

回复 634996425 的帖子7 T& N( [1 D- }) U6 S* ^, ]4 F1 x6 S
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多谢指教，我用你的方法试试看

bsx1111

我建议你用生理盐水冲洗一次到两次，洗去培养基中的血清，在用胰酶消化

细胞-77

胰酶还有活性吗、还有，你培养基洗干净没？

sdwzg119

回复 dc1818 的帖子$ T1 T5 i% K( }/ y) V2 B) j" v
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一定要洗至少两次再消化的，你下次洗完以后再消化，估计就没问题了，养细胞不能省事的~

jensn

首先，必须有PBS或者HBSS缓冲液彻底的清洗培养瓶中残余的旧培养基，不然以为加下去都被中和了。再者，加入胰酶之后，需要放在37度培养箱中孵育个一两分钟，跟胰酶的最适温度有关。另外，有些细胞本身的特性问题，在我们实验室就发现，同样是培养原代骨髓间充质干细胞，C57老鼠就比BALB/C的要好消化，人脐带的间充质干细胞就更好消化。这个原因我想可能跟不同种属的实验动物，其原代细胞的均一性有关。

dc1818

回复 jensn 的帖子7 K& M5 u( P! Y$ Z  R, E$ H+ q
. k+ Q, F6 M/ f
放培养箱消化挺有意思的，下次试试