脐带间充质干细胞形态求分析

huajie881026

养了几次脐带MSCs，细胞总是老化很快，前些日子也在版内发帖求助了一番，有大侠跟我说他一条脐带最多能传40代，这对我目前的状态来说简直是不可想象，所以想改进细胞培养方面的技术。在此麻烦大家伙指点一二！4 r: v; ~: i0 Z1 w
想请问：我用的是DMEM-LG+10%FBS+1%双抗，一定需要加bFGF吗？: E( L4 L6 u2 W, a; U' S
胰酶现在的消化时间控制的还可以，昨天看到有文献说用0.05%胰酶消化1-2min的，我又一次怀疑自己的胰酶是不是加多了。我一般0.25%胰酶+EDTA在T25培养瓶里加500-800ul，之前PBS洗了之后培养瓶里留0.5ml左右，相当于等比稀释胰酶，这样消化约1min，然后终止消化。  Z+ N" _. B8 k& @; w/ E: P% J4 F
我想找出更多影响细胞状态的原因，求指点！: w# s7 t7 E  B9 ]' C+ f7 r
下面是我养的图片6 c; z  H- R8 M$ V
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thomassun2008

bFGF是呈纤维样细胞生长因子，加了细胞会变成短梭样，细胞不会很快变得宽大。并且你用的是FBS培养的，消化一般0.25胰酶，37度温箱4-5分钟。而如果你换成人血清培养0.05胰酶室温1分钟就下来了，并且人血清培养的细胞会较慢出现扁平宽大样（一般p3,p4后才出现吧），建议你可以换用人血清试试。

yinfuhua

回复 huajie881026 的帖子& v" d( K' M2 v/ @) W

9 {, _  |8 T5 p8 ?. s# S2 t我认为细胞状态良好啊。P1、P2的密度传代都可以。加bFGF长得会更快更好。

huajie881026

回复 笨球球开心 的帖子: Q0 h! [, W' W6 t3 X( J7 `  {. D

+ e( o1 B4 f2 S: u4 g阳性的CD73，90，105，44.0 p! ?$ b* j# \; h
阴性的CD11b，19， 31，45，HLA-DR

笨球球开心

回复 huajie881026 的帖子1 x+ N. s5 j) h6 O) Y6 D7 x# ~
* `6 T; }5 o, G/ P* q$ a! o
你选CD？有好多种，因资金不足，只能选几个，但不知道哪种阳性率高，文献各说纷纭……请教一下……谢谢！

huajie881026

回复 笨球球开心 的帖子* T, y& Z) y$ u7 C* [) K' d
! t0 s3 O3 i# U5 X
脐血的还没测啊   我这是脐带的，都一样的  用的是相同的抗体

笨球球开心

回复 wind789 的帖子
* z- g# n4 W& u; o
( Q0 N8 w$ [. t, N但是血清太低，细胞养不好……

笨球球开心

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7 k3 c) w  K; {; n3 S$ p& B( S* I6 A+ s. W9 [4 P7 o, L9 E
你对脐血细胞行流式细胞仪的CD分子检测验证脐血间质干细胞？如果检测用CD多少？？

askage

看图说话：细胞形态很正常。
" p+ D! l/ H0 o4 F别养太密，细胞接触容易引起增值、分化能力下降。

huajie881026

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7 `1 n; N! Q' R: J" g# U8 c! G1 v5 p9 B. ~4 |; L$ a
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