脐带间充质干细胞形态求分析

huajie881026

养了几次脐带MSCs，细胞总是老化很快，前些日子也在版内发帖求助了一番，有大侠跟我说他一条脐带最多能传40代，这对我目前的状态来说简直是不可想象，所以想改进细胞培养方面的技术。在此麻烦大家伙指点一二！* ~' i+ t; F: ?$ B+ y; }/ @5 _
想请问：我用的是DMEM-LG+10%FBS+1%双抗，一定需要加bFGF吗？
# E! I- g; w5 h; y% ^( w2 c/ x胰酶现在的消化时间控制的还可以，昨天看到有文献说用0.05%胰酶消化1-2min的，我又一次怀疑自己的胰酶是不是加多了。我一般0.25%胰酶+EDTA在T25培养瓶里加500-800ul，之前PBS洗了之后培养瓶里留0.5ml左右，相当于等比稀释胰酶，这样消化约1min，然后终止消化。
7 `- c3 _8 y2 _- m5 x- v9 a" U6 }我想找出更多影响细胞状态的原因，求指点！4 f* Q9 ?; u# E5 [
下面是我养的图片
# c+ t; U2 a2 T2 T+ e8 d6 _6 W7 h1 \P0% s8 ^$ t# f: N6 {% F7 s1 W

2 K6 o& M5 P  u! B4 `1 H: g6 pP1
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gghywtfz

我觉得最大可能是因为你使用的血清并非筛选过的血清。7 o" ]" |( Q  \, _7 _4 M! O
另外，可以在培养基里加进去2mM L-glutamin
; n3 A' a7 }, a/ F/ z一般MSC对L-glutamin比较敏感。
+ w( S1 U: n/ Y( |8 a& X; b) T8 O) V; g1 A' l! X+ i5 k+ K

willing

我养脂肪间质干细胞有同样的困扰。。。。求解答。。。

ind6562

如果你想让细胞活力更好，最好加加bFGF。
6 J( X1 E0 [' O: z2 M! v- F9 {3 A把种瓶密度调点，间充质细胞要保证细胞间的接触活力才会好。当然原代细胞不好调整密度，但你可以早点传代，不一定要等它们长到80%的汇合度，你这一等，细胞可能就老了。

ind6562

不好意思，是种瓶密度调高点

SKC-SFC

从你的细胞图片来看，并没有多老，属于正常情况

huajie881026

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  X1 J, h3 c6 U- K& `2 f
4 w* j* ~! e% l我一般是5000-10000cells/cm2，5天左右可以传一代。( Q* F* O0 A+ w: R6 R
bFGF是重组人bFGF吗？

huajie881026

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. _7 o& r3 S& b' x# ]7 X% X* Z% ~6 X' D2 G- Z. P8 g! U$ J
我用的是GlutaMAX，长效的
* G; X8 k7 X7 `血清的话的确是没有筛选过的血清，请问哪个公司有适于这个细胞生长的血清呢？

流泪的鱼

你中和的方法考虑到了吗？这步是细节，也很重要。我以前曾经犯过小错误，导致传代后的细胞长势不好，好好注意实验的每一步骤。

ind6562

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9 b0 B- g$ X" ^+ d- j* e4 U
5 }/ f1 k) Y5 ?2 X3 @7 C5 p9 H我们一般种的密度是500000CELL/T25培养瓶，这样算下来是20000cells/cm2，你的密度我认为是偏小了。; o. d) |; X# w4 a
我没用过bFGF，有同学用的说是重组人bFGF，但你买之前应该自己先了解下。