脐带间充质干细胞形态求分析

huajie881026

养了几次脐带MSCs，细胞总是老化很快，前些日子也在版内发帖求助了一番，有大侠跟我说他一条脐带最多能传40代，这对我目前的状态来说简直是不可想象，所以想改进细胞培养方面的技术。在此麻烦大家伙指点一二！4 e3 M9 l( }3 `6 [: u
想请问：我用的是DMEM-LG+10%FBS+1%双抗，一定需要加bFGF吗？
7 p) a# U5 A- A7 p/ `3 m胰酶现在的消化时间控制的还可以，昨天看到有文献说用0.05%胰酶消化1-2min的，我又一次怀疑自己的胰酶是不是加多了。我一般0.25%胰酶+EDTA在T25培养瓶里加500-800ul，之前PBS洗了之后培养瓶里留0.5ml左右，相当于等比稀释胰酶，这样消化约1min，然后终止消化。
7 ~) k) B# `( B我想找出更多影响细胞状态的原因，求指点！
- G" s7 m; }+ X: m* g9 o下面是我养的图片, H- L# @3 r+ w6 K, X
P0! J: S5 x, n* ~

5 z. i8 ~8 v) R2 QP1" ]. r# n8 z/ W. q* |
3 g* h4 i7 a% B
P25 L' M8 L2 n" o5 Q1 r

gghywtfz

我觉得最大可能是因为你使用的血清并非筛选过的血清。
6 G! O( m4 v8 A2 I$ U6 S另外，可以在培养基里加进去2mM L-glutamin
+ [0 t6 @6 }+ z1 b8 C一般MSC对L-glutamin比较敏感。, T! A, t. l- N! N5 v9 B% V

) S/ ~3 X/ l2 `# m! k* M$ c* P

willing

我养脂肪间质干细胞有同样的困扰。。。。求解答。。。

ind6562

如果你想让细胞活力更好，最好加加bFGF。4 h  E, q0 o$ N8 E" B, a3 w6 Z! a3 Q3 K
把种瓶密度调点，间充质细胞要保证细胞间的接触活力才会好。当然原代细胞不好调整密度，但你可以早点传代，不一定要等它们长到80%的汇合度，你这一等，细胞可能就老了。

ind6562

不好意思，是种瓶密度调高点

SKC-SFC

从你的细胞图片来看，并没有多老，属于正常情况

huajie881026

回复 ind6562 的帖子
6 F0 P5 T- L6 m3 I4 }4 n- }, {; a% y  X. q8 Z/ _/ p
我一般是5000-10000cells/cm2，5天左右可以传一代。% K3 M7 |4 ]0 P3 @- _7 d0 ]7 n
bFGF是重组人bFGF吗？

huajie881026

回复 gghywtfz 的帖子- y4 u5 S0 [6 u+ r: F6 W! v& N0 ~

- G9 t1 _2 h8 h) m! L& n) Z* V我用的是GlutaMAX，长效的
1 K. L; Z' y' L/ [血清的话的确是没有筛选过的血清，请问哪个公司有适于这个细胞生长的血清呢？

流泪的鱼

你中和的方法考虑到了吗？这步是细节，也很重要。我以前曾经犯过小错误，导致传代后的细胞长势不好，好好注意实验的每一步骤。

ind6562

回复 huajie881026 的帖子) v/ O. G' q( _/ c

# S0 R) J: D9 d9 E! j我们一般种的密度是500000CELL/T25培养瓶，这样算下来是20000cells/cm2，你的密度我认为是偏小了。  F, U" t/ _# O# O' E1 q
我没用过bFGF，有同学用的说是重组人bFGF，但你买之前应该自己先了解下。