脐带间充质干细胞形态求分析

huajie881026

养了几次脐带MSCs，细胞总是老化很快，前些日子也在版内发帖求助了一番，有大侠跟我说他一条脐带最多能传40代，这对我目前的状态来说简直是不可想象，所以想改进细胞培养方面的技术。在此麻烦大家伙指点一二！
; ]4 y- i1 [& g# `想请问：我用的是DMEM-LG+10%FBS+1%双抗，一定需要加bFGF吗？
8 ]" V1 s' u5 o胰酶现在的消化时间控制的还可以，昨天看到有文献说用0.05%胰酶消化1-2min的，我又一次怀疑自己的胰酶是不是加多了。我一般0.25%胰酶+EDTA在T25培养瓶里加500-800ul，之前PBS洗了之后培养瓶里留0.5ml左右，相当于等比稀释胰酶，这样消化约1min，然后终止消化。6 u& |" A3 a; f  W3 p: ]
我想找出更多影响细胞状态的原因，求指点！' J5 y& m4 M5 Q/ X
下面是我养的图片
1 m- }; [2 w- o9 o( o9 Z; y: {* TP0& w% Z- ^) Z' \4 I

  q' F' B$ M" N7 M* {P1" U% h1 v% A1 }6 B6 U( p) I' j
% f% f: {) L) g% ~
P2
& H  u3 G0 U- e5 c$ Z; }+ @7 g7 ]

gghywtfz

我觉得最大可能是因为你使用的血清并非筛选过的血清。0 F2 r# D' f7 F4 g3 e* W) V: O- q+ {) B
另外，可以在培养基里加进去2mM L-glutamin0 Q; J. u# @! m" l" L  L2 ~/ F
一般MSC对L-glutamin比较敏感。
4 I( m2 x" X* I- s
- `: |5 m; g' }. R2 I- I' K

willing

我养脂肪间质干细胞有同样的困扰。。。。求解答。。。

ind6562

如果你想让细胞活力更好，最好加加bFGF。2 o$ t3 Y6 q! d7 ~  v$ D6 x
把种瓶密度调点，间充质细胞要保证细胞间的接触活力才会好。当然原代细胞不好调整密度，但你可以早点传代，不一定要等它们长到80%的汇合度，你这一等，细胞可能就老了。

ind6562

不好意思，是种瓶密度调高点

SKC-SFC

从你的细胞图片来看，并没有多老，属于正常情况

huajie881026

回复 ind6562 的帖子. L5 K: F# Z2 }5 j$ p! {' R

6 {4 V9 W6 h+ A: Z) x我一般是5000-10000cells/cm2，5天左右可以传一代。- W( E/ |. n1 _
bFGF是重组人bFGF吗？

huajie881026

回复 gghywtfz 的帖子' e- x: p  z' A  }9 @  Z2 ~

6 w* a5 U4 z5 r3 M7 B0 ?1 v我用的是GlutaMAX，长效的" z" c! T* f7 ?, ^$ f: l
血清的话的确是没有筛选过的血清，请问哪个公司有适于这个细胞生长的血清呢？

流泪的鱼

你中和的方法考虑到了吗？这步是细节，也很重要。我以前曾经犯过小错误，导致传代后的细胞长势不好，好好注意实验的每一步骤。

ind6562

回复 huajie881026 的帖子
& o* z) k% M: N# F; h( c# L
2 j9 G# z# K) g# Z* a0 T9 ~我们一般种的密度是500000CELL/T25培养瓶，这样算下来是20000cells/cm2，你的密度我认为是偏小了。' d" A/ e7 k% v+ {, A' l3 i. r7 J
我没用过bFGF，有同学用的说是重组人bFGF，但你买之前应该自己先了解下。