求高人指点慢病毒浓缩和保存的问题

第一心音

我在做IPS，也是用经典的四因子做感染，但是不知道该怎么收集病毒液，感染是一次感染好还是两次感染好，四因子一起感染好还是分开多次感染好，病毒是怎么浓缩的，听说超速离心机可以浓缩，但是不知道怎么操作，转速多少，时间多少，需要买什么器械吗？还有，病毒保存的问题，如果-80保存可以用多久，我是新手，求高人指点，感激不尽。

goodboy

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; ]' p5 B( M; L) J0 G9 N# N7 n4 n. R$ w8 x* }+ b) B; ~4 _
这个我不太清楚哈，如果直接感染细胞的话可以用了，我们实验室有这样做的，效果也不错。

huangcong1988

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& e# W% N! ?: _不辐照呢？辐照是消毒吗？还是杀菌呢？把外面用酒精棉擦拭干净不行吗？

huangcong1988

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7 d  m1 |: @4 T, P) ~) E9 d; p3 U1 z& i# w7 h) _+ E& e5 F
非常感谢，我用来感染细胞的，那么就是说4000g离心20min以后就可以直接用于感染细胞了吗？

goodboy

回复 huangcong1988 的帖子" b# D2 N+ f, V- Y3 N2 n0 s

% X4 E0 j$ f8 g+ B( U3 F" m具体的我们也不清楚，只知道拿去那家公司辐照，几天后再拿回来，貌似是gamma射线呢（不确定）。至于为什么要高速离心，因millipore的15ml离心管你能收集到的病毒原液很多，应该至少3-4ml.我们如果用来打动物的时候这么大体积的病毒量会带来很多麻烦，如果你做细胞的话没有问题，可以不用高速离心。再说了，超速离心后蛋白还是很多的，因此我们添加有20%蔗糖除蛋白，25000rpm离心2小时后过夜溶解病毒第二天分装并测定滴度

huangcong1988

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不是紫外，那用什么照呢？浓缩以后还要高速离心？这是为什么呢？

goodboy

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( ]5 _4 j" E) ^+ I
( @. D/ a$ M1 d我看了一下，是这个柱子哈。所以浓缩后高速离心的时候我们加20%蔗糖以去除蛋白。还有辐照不是紫外照射呢。

huangcong1988

回复 FYH 的帖子8 Y0 V: v$ Y  E" J1 |, P2 i
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是millipore的 15ml 100KD吗？这个柱子吗？

huangcong1988

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3 W2 t# X: g0 F# a6 N( C% {  a是millipore的15ml 100KD吗？这个貌似是浓缩蛋白的吧？做蛋白那一块的吧？

huangcong1988

回复 goodboy 的帖子& B" |- X$ |3 \( [% I- u& ?; X

1 B: A0 C# P5 d2 U4 i, Y辐照就是紫外照是吧？密理博的，我看过，貌似6000多，你们浓缩都用那个？