求高人指点慢病毒浓缩和保存的问题

第一心音

我在做IPS，也是用经典的四因子做感染，但是不知道该怎么收集病毒液，感染是一次感染好还是两次感染好，四因子一起感染好还是分开多次感染好，病毒是怎么浓缩的，听说超速离心机可以浓缩，但是不知道怎么操作，转速多少，时间多少，需要买什么器械吗？还有，病毒保存的问题，如果-80保存可以用多久，我是新手，求高人指点，感激不尽。

goodboy

回复 huangcong1988 的帖子
* w: v9 n/ B, Q) N
: O6 F0 G& Y/ c; L( C这个我不太清楚哈，如果直接感染细胞的话可以用了，我们实验室有这样做的，效果也不错。

huangcong1988

回复 goodboy 的帖子
) I; V6 A% o) c$ v' |1 D. A) S# }4 w7 e7 ]6 }; Q
不辐照呢？辐照是消毒吗？还是杀菌呢？把外面用酒精棉擦拭干净不行吗？

huangcong1988

回复 goodboy 的帖子( V7 U! {2 U$ [$ a* z
3 n& g& e" W2 d- D2 m! S' V$ X9 s
非常感谢，我用来感染细胞的，那么就是说4000g离心20min以后就可以直接用于感染细胞了吗？

goodboy

回复 huangcong1988 的帖子
  J8 X7 Z2 q( V4 S8 w
$ _' _) w6 D) f8 H3 u具体的我们也不清楚，只知道拿去那家公司辐照，几天后再拿回来，貌似是gamma射线呢（不确定）。至于为什么要高速离心，因millipore的15ml离心管你能收集到的病毒原液很多，应该至少3-4ml.我们如果用来打动物的时候这么大体积的病毒量会带来很多麻烦，如果你做细胞的话没有问题，可以不用高速离心。再说了，超速离心后蛋白还是很多的，因此我们添加有20%蔗糖除蛋白，25000rpm离心2小时后过夜溶解病毒第二天分装并测定滴度

huangcong1988

回复 goodboy 的帖子
% p& W2 j# M8 j. ?  t
! d4 C/ ~& K( i" U, ^' H不是紫外，那用什么照呢？浓缩以后还要高速离心？这是为什么呢？

goodboy

回复 huangcong1988 的帖子* Z, Q, ]" Z: t4 K* @1 N8 [

: o8 d6 P7 I. K/ U9 t: z1 n* A我看了一下，是这个柱子哈。所以浓缩后高速离心的时候我们加20%蔗糖以去除蛋白。还有辐照不是紫外照射呢。

huangcong1988

回复 FYH 的帖子
: D' s3 c3 h! ]) G2 ?* a# q$ e5 g* N5 d- A& R0 x, y- v) ~
是millipore的 15ml 100KD吗？这个柱子吗？

huangcong1988

回复 goodboy 的帖子
9 n. v- L+ N* c3 p2 Y
, A$ ~2 x* m* Q$ \& a是millipore的15ml 100KD吗？这个貌似是浓缩蛋白的吧？做蛋白那一块的吧？

huangcong1988

回复 goodboy 的帖子& A) H" m% n4 m  j+ U- @( B2 p

/ t2 s; ^1 g2 u, v$ k0 g辐照就是紫外照是吧？密理博的，我看过，貌似6000多，你们浓缩都用那个？