求高人指点慢病毒浓缩和保存的问题

第一心音

我在做IPS，也是用经典的四因子做感染，但是不知道该怎么收集病毒液，感染是一次感染好还是两次感染好，四因子一起感染好还是分开多次感染好，病毒是怎么浓缩的，听说超速离心机可以浓缩，但是不知道怎么操作，转速多少，时间多少，需要买什么器械吗？还有，病毒保存的问题，如果-80保存可以用多久，我是新手，求高人指点，感激不尽。

您好，请问你是做人的ips,还是小鼠的ips，我前段时间向别人要了ips细胞做心肌细胞分化，做不出来，打算自己诱导一下；能不能送我一套诱导的质粒，谢谢！我这边是浙江宁波的。

FYH

我是做人的Ips,根据我的经验，病毒液收集（48H，72H）后，病毒浓缩柱子，可以浓缩20倍，足够用于ips 的诱导， 如果病毒包的好， 直接感染也行， 2-4轮都行。

huangcong1988

回复 FYH 的帖子. s; e0 e7 r  ~0 B
9 `) x+ O' ^& T: s1 R6 }
哪里订购这种浓缩柱呢？价格呢？我也是想浓缩一下病毒，想问一下您转染的话，转293T效率多高？用lip2000

goodboy

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- S( y& n+ _4 D9 N7 V  b/ ^6 U& |7 e* X* t
我们用的是millipore的，价格应该不菲，我不是很确定，使用之前需要辐照灭菌。8 F; }  B, o5 W6 R: F2 N' F7 D
至于转染的话，你如果小剂量包装的话用lipo2000应该没有问题，如果包装的多的话建议用CAPO4转染，具体的protocol网上有。祝你成功

huangcong1988

回复 goodboy 的帖子; q9 z4 d5 M8 q  b5 a. ?  G3 r& ?
( z- G" ?- _5 U" N; j  l
辐照就是紫外照是吧？密理博的，我看过，貌似6000多，你们浓缩都用那个？

huangcong1988

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是millipore的15ml 100KD吗？这个貌似是浓缩蛋白的吧？做蛋白那一块的吧？

huangcong1988

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& V) n; s" V( m是millipore的 15ml 100KD吗？这个柱子吗？

goodboy

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  r$ B8 q8 b0 I+ X: A; ]
) I3 K; z4 }* i我看了一下，是这个柱子哈。所以浓缩后高速离心的时候我们加20%蔗糖以去除蛋白。还有辐照不是紫外照射呢。

huangcong1988

回复 goodboy 的帖子3 x+ f9 K* X' N7 K

' v2 T3 L9 {! k+ Y* J2 J; K2 ~% S不是紫外，那用什么照呢？浓缩以后还要高速离心？这是为什么呢？