DC细胞的培养方案和流式检测？

hwlightning

1、准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）。
" A, j* I, \0 ^- K" `7 q7 p$ w3 ?9 \0 ~; F2、将外周血单个核细胞在铺在培养瓶中，用加入25 mL免疫细胞无血清培养基
3 p* S/ _1 q; s3、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中孵育2〜3小时, E" X* _: h$ k3 a+ y" o5 T
4、弃掉含非贴壁细胞的培养基  F3 `2 P6 ^$ \' x5 Y, F
5、添加50 ng / mL的重组人IL-4和100 ng / mL的重组人GM-CSF
4 M1 O. V3 [2 \$ ]( I- W6、两天后半量换液，同时添加IL-4和GM-CSF
2 p  Z' _' a6 `  N8 I7、5天后添加TNF-α进行诱导50ng/ml，诱导1~2天: M7 a. P4 w+ h: f8 J( J; G- }
不知道这个方案会不会存在一些问题，因子的浓度合适吗？
2 n: T1 H& V/ e( `  r5 g) ]4 O诱导后的DC不增值，一般100ml外周血能诱导出DC细胞的量是多少？0 R" Y4 n" w" E8 L
流式检测CD80, CD86,CD83、CD11c、HLA-DR，做完表型分析，基本上就没有多少细胞了，或者根本就不够用来做表型分析.5 Z/ j% _+ V" M2 G8 ~
请问下做DC-CIK细胞回输人体，要不要做流式分析？

yubin083

就我的经验，DC一般不会是梭形很长的那种细胞，如果你想证实，可以做FACS检测其phenotype

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子0 E/ r2 G( X, R1 J. S8 }: I! J

5 _: C6 J% z7 `  p; N6 d不用就在原瓶就成，加tnf之前不用吹

hwlightning

回复 星火燎原 的帖子& h7 m2 P* P# P% o4 S- Y" I# W

$ B, W- s- H4 }, a1 P最后加TNF诱导成熟的时候，要不要把细胞吹起来加入另一个培养瓶再进行诱导？？？
7 L3 a8 S7 Q2 W  W  A" g6 \! b

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子2 E8 G4 z% |2 Y2 B

5 r* w; ~6 j- b4 X' W( H有的，诱导也不会是同步的，出细胞的时候吹打一下

hwlightning

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8 \! r! L/ @9 {5 D我觉得贴壁的细胞有可能也有DC细胞吧？？？？

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子2 ^% x" _+ w" [3 F! y/ M

; L. y4 b. _  Z& y% _+ m! u我觉得尽量别去动它，成熟过程中

hwlightning

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& G* H4 I/ J6 o. L  Y
" P+ t1 R+ Z8 @( q8 F+ Q2 L我看贴壁的细胞是那种很细长的那种，比直的梭型，两端很细长。
& i' [6 @1 Z; w3 u+ V( o细长端有的又有很多分枝。
% Q  R. s4 P6 M' j3 @再请问下加TNF-a刺激成熟时要不要把贴壁的细胞吹打起来+ d- U* O* }. `
就是最后一次加因子要不要吹打细胞？

hwlightning

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$ W/ W& J8 Z! r7 b
那不是对因子的需求量很大，可不可以先把细胞吹打下来离心后加完全培养基重悬刺激成熟？

星火燎原

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) Y: w# ~5 D3 p! G# z/ d) G) L! _/ O, E6 F9 @, R- L) K
换液肯定损失细胞，可以不用换液，补培养基同时补加因子