DC细胞的培养方案和流式检测？

hwlightning

1、准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）。
) B# P( w  a. N& a9 t; g. O- B- ]9 c2、将外周血单个核细胞在铺在培养瓶中，用加入25 mL免疫细胞无血清培养基
7 J+ f- Y: u$ h2 m3、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中孵育2〜3小时
' g0 \* _- T! Q  s4、弃掉含非贴壁细胞的培养基: E8 l  L& j: e, F7 o8 r1 Z
5、添加50 ng / mL的重组人IL-4和100 ng / mL的重组人GM-CSF' P+ h# d5 H, o2 \0 i% K! J0 k% |
6、两天后半量换液，同时添加IL-4和GM-CSF
, }6 j) t5 Y/ m  G7 r7、5天后添加TNF-α进行诱导50ng/ml，诱导1~2天5 V2 G2 B  ?) \/ p% J4 W) F: W
不知道这个方案会不会存在一些问题，因子的浓度合适吗？
" u( k8 f* d* ~" x, b诱导后的DC不增值，一般100ml外周血能诱导出DC细胞的量是多少？) y) b; C3 x. X/ S! M
流式检测CD80, CD86,CD83、CD11c、HLA-DR，做完表型分析，基本上就没有多少细胞了，或者根本就不够用来做表型分析.
# o) }; k& Q- {) e" x" d0 z请问下做DC-CIK细胞回输人体，要不要做流式分析？

hwlightning

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, x; u' ^0 z8 W8 z  k7 T' j! `' a9 c: l, @8 }- W% c$ w3 ?
我今天看细胞的时候发现有很多贴壁的细胞，但是贴壁的细胞也有很多树突状。

hwlightning

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7 N* Z  e' v5 O' g2 V: f
# w2 s+ N( c. ~9 X/ |: ]是不是成熟的DC细胞是悬浮的细胞，
( M$ |$ j5 C  ?" Y我最近看我养的DC有很多悬浮的，和贴壁的，如果我半量换液的话会不会损失掉很多细胞？
% x+ l& \5 U( @3 G

hwlightning

回复 星火燎原 的帖子' ]) J) z  R9 B6 {9 P* [4 U
" D% t8 o( T- q1 }) }1 _2 c' u: _- o
那不是对因子的需求量很大，可不可以先把细胞吹打下来离心后加完全培养基重悬刺激成熟？

hwlightning

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9 p2 P: m5 I+ @* s) D2 p9 o* U* J: L
我看贴壁的细胞是那种很细长的那种，比直的梭型，两端很细长。7 Y) @( ]" I' J' y' Q
细长端有的又有很多分枝。
% q" C5 @. p& ^5 {再请问下加TNF-a刺激成熟时要不要把贴壁的细胞吹打起来: Q! Y9 v2 T2 t% E5 q, `3 w
就是最后一次加因子要不要吹打细胞？

hwlightning

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' Q. r3 n1 @1 y. _0 U! s
我觉得贴壁的细胞有可能也有DC细胞吧？？？？

hwlightning

回复 星火燎原 的帖子! Y+ [$ d* D% ?/ g

0 B2 L! x4 @6 k/ _; S最后加TNF诱导成熟的时候，要不要把细胞吹起来加入另一个培养瓶再进行诱导？？？
! w3 v/ ^1 _" {+ z9 G; I3 y  X