请帮我看看养的干细胞是不是老化了？还是污染了？谢谢

bty007

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我养的小鼠干细胞才传到第三代，感觉细胞就不太好了，是污染了吗？- ?9 s6 Q% n5 t% h6 T2 n8 s
图里面发白的那种圆圈是什么？. ^6 l/ ]( Z$ A2 y) s- s( ?! N
应该不是死细胞吧？好像不动。。冲不掉。。。/ ]3 F8 S' }! V7 Y* f2 O
是不是胰酶消化时间过长细胞易老化？我消化了四分钟吧5 D+ p. E7 G2 V0 ^! o

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* v5 o+ K4 Q5 W3 Q1 T- _上面是小鼠颌骨骨髓间充质干细胞第3代
) d& {+ |2 F9 p; s  N7 N  l下面一张是小鼠髂骨第三代的，长得形状也好奇怪
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若兰汀

我养过小鼠骨髓间充质干细胞，小鼠来源的细胞并不像大鼠或者人来源的间充质细胞一样有典型的梭状细胞形态，我看你颌骨的那张单从形态上来看和我的很像（我买的商品化的细胞株），应该没问题，但是那个髂骨的我就说不好了，小鼠的细胞挺难建系的，很难纯化干净。另外那个亮点你不用在意，不是污染，我养的时候也会这样，一般细胞状态不错的时候才会有，而且这个也与你拍照时使用的光圈强度有关。不同品系的小鼠的细胞质量相差很大，C57就比Balb/c活力强很多，我的经验是，老鼠的生命力越顽强，分离的细胞也越好。祝你实验顺利！

若兰汀

另外，建议你买商品化的小鼠间充质培养基，还有每次换液的时候半量换液或1/3比例换液，传代时不宜过稀，细胞长得会整齐一点，而且形态也好看一些。

liuyul03

个人感觉细胞老化还是很明显的，另外图中发白的圆圈在我的其他动物BMSCs培养中也有见到，我觉得是细胞，发亮，圆形或椭圆形，两端有细丝，想请教高人，是否是自发分化为神经细胞啊

bty007

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" e( |$ O3 {" Z$ f非常感谢哈~~听到这样说我就放心了，准备做检测呢，发现传代后细胞跟原代相差好大，都有点不敢做了

bty007

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6 Z* `% S0 K7 s7 p/ h- u8 A嗯。。我只有原代24h后是半量换液，之后就都是全量换了，有时看到还有好多死细胞漂的时候就PBS冲下，细胞贴壁挺紧的，冲下没关系吧，不用冲的话自己感觉细胞容易污染，也不知道对不对？

bty007

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! Y' H5 s$ Y% o我就是奇怪为什么才3代细胞就老了。。。有必要加生长因子吗？
  U- T  r8 k: Y% M发亮的有可能是混进去的杂细胞吗？我看的时候是发现亮的越来越多，就有点担心是什么污染混进去了

若兰汀

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有条件的话用DMEM：F12冲洗吧，我买的商品化的培养基套装，kit里面就配有L-谷氨酰胺。

Donnies

应该是细胞老化了，细胞老化的话，形态也会出现很大的变化，而且很容易消化，但是如果你消化下来再进行传代的话，细胞基本上就挂了，如果是污染的话，你在显微镜下会明显看到细胞的表面漂浮着一层东西

bty007

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谢谢。3 S% n/ }6 e9 ~* y
后来看貌似细胞恢复了点形态，有点儿立体的感觉了。。之后又传了2代，目前细胞还好，倒没有污染的浑浊的迹象，就是还会有圆圈的贴壁挺紧的细胞。。" ], H9 j+ g0 a, Q8 Y
想想可能跟我中途换培养液有关，开始养细胞用的是国产的DMEM，后来换成Hyclone的了，可能是细胞不适应的关系才长不太好了