求助间充质干细胞脾内注射流程

songyang1987

之前做过了尾静脉注射MSC 但是小鼠的死亡率极高 所以想换做脾内注射 想请教做过的大侠 给个流程哈 例如20g小鼠戊巴比妥钠的用量9 I6 z9 z: ?) T* T( y" w, b, O4 [
谢谢各位啦

sysuhoo

尾静脉注射msc在4*106个细胞以下肯定是不会导致死亡的，体积最好控制在1ml以下，不要推太急，就我们实验室注射了上百只来看，死亡率极低0 e4 e- e+ [4 d$ x. {: c
个人推测楼主很可能是在细胞密度和量上的问题，一般操作是不会导致死亡的

ljs

楼主的MSC细胞在注射前将细胞吹打成单个细胞，加入些因子，保持细胞不成团，注射前过滤网，过滤掉细胞团，注射过程不能太急，也不能太慢，注射太慢，细胞也有成团的可能。所以楼主把条件优化下，小鼠不会死亡的。

songyang1987

回复 sysuhoo 的帖子- e. B  H  F( K, I. \. o# u; |4 R
/ I0 F1 M% B, H& t  l" H) a
我昨天又做了一次 细胞浓度是 5*10^6 注射了0.2ml 即每只鼠打了10^6个细胞 还加了2%的胎牛血清 细胞还是会成团 打了四只 当场死了2只 今早另2只也都死了 请问 你们是如何操作的呢？" C4 r2 |. t2 G1 B# Y

songyang1987

回复 ljs 的帖子  e$ C/ Z( q; F2 G  u, S. Z3 q5 s

5 c0 T" p1 l( O  M3 g; q8 m估计过滤网也不行哈 我消化下来都是没有细胞团的 注射一会儿 就能看到细胞团了啊 怎么办啊

sysuhoo

楼主你的细胞浓度太高了，建议你调整为2*106/ml，细胞密度调整以前一定要用200目的筛子过滤，而且不能用含有血清的PBS，纯的冰冷PBS，过滤之后调整密度要全程冰上放置，这样肯定不会死，如果还是死亡，估计是楼主操作问题。1 K+ }- f$ X8 Q2 K7 Z; Z7 V
还有个方法，就是在注射的细胞中加入少量的肝素。

songyang1987

回复 sysuhoo 的帖子0 X- W' a2 |/ n; V+ ~6 h
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太感谢了啊 我明天试一下

songyang1987

我上周做了一次20g小鼠脾内注射MSCs，2%的戊巴比妥钠腹腔注射0.05ml可麻醉1h，注射量可调整至0.08ml& n& `8 _! ?7 r. E: S# [+ H
细胞浓度可调整为10^7个/ml,注射0.1ml2 i$ V# {1 T4 Y8 ?- i
注射时不用将皮肤下的那层粘膜剪破，垂直于脊柱进针，用镊子辅助一下，若是找不到脾脏也可以将粘膜剪破，但小鼠比较容易感染，在伤口上撒上青霉素粉末，将伤口缝合即可% ]" Y. j* ]& |/ G2 r8 X# c5 }( m