求助间充质干细胞脾内注射流程

songyang1987

之前做过了尾静脉注射MSC 但是小鼠的死亡率极高 所以想换做脾内注射 想请教做过的大侠 给个流程哈 例如20g小鼠戊巴比妥钠的用量# w# q+ _; T( S# w! y
谢谢各位啦

sysuhoo

尾静脉注射msc在4*106个细胞以下肯定是不会导致死亡的，体积最好控制在1ml以下，不要推太急，就我们实验室注射了上百只来看，死亡率极低6 G/ @2 g/ Y3 U) S+ \
个人推测楼主很可能是在细胞密度和量上的问题，一般操作是不会导致死亡的

ljs

楼主的MSC细胞在注射前将细胞吹打成单个细胞，加入些因子，保持细胞不成团，注射前过滤网，过滤掉细胞团，注射过程不能太急，也不能太慢，注射太慢，细胞也有成团的可能。所以楼主把条件优化下，小鼠不会死亡的。

songyang1987

回复 sysuhoo 的帖子. C3 ^4 f$ J* Y8 g/ O$ c/ k6 z( J' g
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我昨天又做了一次 细胞浓度是 5*10^6 注射了0.2ml 即每只鼠打了10^6个细胞 还加了2%的胎牛血清 细胞还是会成团 打了四只 当场死了2只 今早另2只也都死了 请问 你们是如何操作的呢？6 c5 }% _* t: B% U7 v

songyang1987

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5 R. d$ f2 |8 J
& M1 |2 C6 Z& `1 i9 a估计过滤网也不行哈 我消化下来都是没有细胞团的 注射一会儿 就能看到细胞团了啊 怎么办啊

sysuhoo

楼主你的细胞浓度太高了，建议你调整为2*106/ml，细胞密度调整以前一定要用200目的筛子过滤，而且不能用含有血清的PBS，纯的冰冷PBS，过滤之后调整密度要全程冰上放置，这样肯定不会死，如果还是死亡，估计是楼主操作问题。
$ H* c9 m: n, e( `. J  u& R/ K还有个方法，就是在注射的细胞中加入少量的肝素。

songyang1987

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$ r# ~$ h5 f" p* ]/ Y) U# q, m/ R' b0 g+ V! |# L: J
太感谢了啊 我明天试一下

songyang1987

我上周做了一次20g小鼠脾内注射MSCs，2%的戊巴比妥钠腹腔注射0.05ml可麻醉1h，注射量可调整至0.08ml4 @. o6 z) f' m/ Y# Z
细胞浓度可调整为10^7个/ml,注射0.1ml& V! E+ l) ?# z, N0 P
注射时不用将皮肤下的那层粘膜剪破，垂直于脊柱进针，用镊子辅助一下，若是找不到脾脏也可以将粘膜剪破，但小鼠比较容易感染，在伤口上撒上青霉素粉末，将伤口缝合即可& L; g+ O7 v( a/ m