overlap PCR引物设计

wangsandan0503

需要在cmv启动子后面做个融合蛋白：
& a+ d; A  f% x1 X! i7 Z前面的基因为：atggaagacgccaaaaacataaagaaaggcccggcgccattctatccgctggaagatggaaccgctggagagcaactgcataaggctatgaagagatacgccctggttcctggaacaattgcttttacagatgcacatatcgaggtggacatcacttacgctgagtacttcgaaatgtccgttcggttggcagaagctatgaaacgatatgggctgaatacaaatcacagaatcgtcgtatgcagtgaaaactctcttcaattctttatgccggtgttgggcgcgttatttatcggagttgcagttgcgcccgcgaacgacatttataatgaacgtgaattgctcaacagtatgggcatttcgcagcctaccgtggtgttcgtttccaaaaaggggttgcaaaaaattttgaacgtgcaaaaaaagctcccaatcatccaaaaaattattatcatggattctaaaacggattaccagggatttcagtcgatgtacacgttcgtcacatctcatctacctcccggttttaatgaatacgattttgtgccagagtccttcgatagggacaagacaattgcactgatcatgaactcctctggatctactggtctgcctaaaggtgtcgctctgcctcatagaactgcctgcgtgagattctcgcatgccagagatcctatttttggcaatcaaatcattccggatactgcgattttaagtgttgttccattccatcacggttttggaatgtttactacactcggatatttgatatgtggatttcgagtcgtcttaatgtatagatttgaagaagagctgtttctgaggagccttcaggattacaagattcaaagtgcgctgctggtgccaaccctattctccttcttcgccaaaagcactctgattgacaaatacgatttatctaatttacacgaaattgcttctggtggcgctcccctctctaaggaagtcggggaagcggttgccaagaggttccatctgccaggtatcaggcaaggatatgggctcactgagactacatcagctattctgattacacccgagggggatgataaaccgggcgcggtcggtaaagttgttccattttttgaagcgaaggttgtggatctggataccgggaaaacgctgggcgttaatcaaagaggcgaactgtgtgtgagaggtcctatgattatgtccggttatgtaaacaatccggaagcgaccaacgccttgattgacaaggatggatggctacattctggagacatagcttactgggacgaagacgaacacttcttcatcgttgaccgcctgaagtctctgattaagtacaaaggctatcaggtggctcccgctgaattggaatccatcttgctccaacaccccaacatcttcgacgcaggtgtcgcaggtcttcccgacgatgacgccggtgaacttcccgccgccgttgttgttttggagcacggaaagacgatgacggaaaaagagatcgtggattacgtcgccagtcaagtaacaaccgcgaaaaagttgcgcggaggagttgtgtttgtggacgaagtaccgaaaggtcttaccggaaaactcgacgcaagaaaaatcagagagatcctcataaaggccaagaagggcggaaagatcgccgtgtaa" x' a: g+ {5 I
后面的基因为：) d2 q9 r9 {# [5 y2 t
atgga aatatacact tcggataact actccgaaga agtagggtct
9 N  M% X1 }: m# m4 h8 G+ z$ {      121 ggagactatg actccaacaa ggaaccctgc ttccgggatg aaaacgaaaa cttcaacagg
, u2 t* ^, l6 n+ y      181 atcttcctgc ccaccatcta ttttatcatc ttcttgactg gcatagtggg caatgggttg
* P" ?. y$ Q' k      241 gtaatcctgg tcatgggtta ccagaagaag ctgaggagca tgacagacaa gtaccggctg
4 \8 D  j- i( {: X8 b      301 cacctgtccg tggctgacct cctctttgtc atcacactcc ccttctgggc agtggacgcc
+ F5 w8 |0 r+ N% x) p2 j" t6 W      361 atggctgact ggtactttgg gaaattttta tgtaaggctg tgcatatcat ctacaccgtc
/ Q" \: O. E+ ~7 x  t      421 aacctttaca gcagtgttct catcctggcc ttcatcagcc tggaccgcta ccttgccatt
" m: V$ r) K5 @3 F  ~0 Q: w      481 gtccacgcca ccaacagcca gaggccgagg aagctgctgg ctgaaaaggc cgtctatgtg
, W- n4 A0 k; P% C7 |# Z- b6 P- c      541 ggtgtctgga tccccgccct cctcctgact atccctgaca tcatcttcgc cgatgtcagc
6 [1 Q2 `8 z7 o! K8 L; S* L4 U      601 cagggggacg gcaggtacat ctgtgaccgc ctttaccccg acagcctgtg gatggtggtg
. f& ^5 T9 r5 x, p      661 ttccagttcc agcacatcat ggtgggtctc atcctgccgg gcatcgtcat cctgtcctgt8 q0 w2 J+ P& F" n# n
      721 tactgcatca tcatctccaa gctgtcacac tccaagggcc accagaagcg caaggccctc
# z' w; O. P  f0 j/ f      781 aagactacgg tcatccttat cctggctttc tttgcctgct ggctaccgta ttacgtgggg+ X. `( Q1 _# [2 [, R/ d+ Y! Z
      841 atcagcatcg attccttcat ccttttggag gtcatcaagc aaggatgtga gttcgagagc- ~1 G; U& n1 W# l* T8 i( s
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1 a  o6 k3 [9 d- _1 Z      961 cccatcctct acgccttcct cggggccaaa ttcaagagct ccgcgcagca tgcactcaat
9 N# f$ l1 _4 X, B; P3 s2 [     1021 tccatgagca gaggctccag cctcaagatc ctttccaaag ggaaacgggg tggacactct4 D9 e! r) x6 ~5 r' \
     1081 tccgtctcca cagagtcaga atcctcaagt tttcactcca gctaa% P- ~6 C: m- o; ]+ l+ O5 ]6 \
如何设计overlap PCR引物，帮忙设计一下，谢谢。

86964109

设计2对引物，A基因上游和B基因下游正常设计，A基因下游和B基因上游引物分别设计30bp左右，A下游3‘端15bp与A基因末尾15bp一致，5’端15bp与B基因起始15bp互补，B上游引物同理，使扩增后的A基因3‘与B基因5’能够有15bp以上互补配对，分别扩增A，B基因，如果产物特异性好可不回收，按照等分子数混合，先进行一次退火，使AB基因融合，补加A上游和B下游引物，继续扩增融合基因。不知我有没有说明白