overlap PCR引物设计

wangsandan0503

需要在cmv启动子后面做个融合蛋白：# w* }: X0 W: G- k9 B
前面的基因为：atggaagacgccaaaaacataaagaaaggcccggcgccattctatccgctggaagatggaaccgctggagagcaactgcataaggctatgaagagatacgccctggttcctggaacaattgcttttacagatgcacatatcgaggtggacatcacttacgctgagtacttcgaaatgtccgttcggttggcagaagctatgaaacgatatgggctgaatacaaatcacagaatcgtcgtatgcagtgaaaactctcttcaattctttatgccggtgttgggcgcgttatttatcggagttgcagttgcgcccgcgaacgacatttataatgaacgtgaattgctcaacagtatgggcatttcgcagcctaccgtggtgttcgtttccaaaaaggggttgcaaaaaattttgaacgtgcaaaaaaagctcccaatcatccaaaaaattattatcatggattctaaaacggattaccagggatttcagtcgatgtacacgttcgtcacatctcatctacctcccggttttaatgaatacgattttgtgccagagtccttcgatagggacaagacaattgcactgatcatgaactcctctggatctactggtctgcctaaaggtgtcgctctgcctcatagaactgcctgcgtgagattctcgcatgccagagatcctatttttggcaatcaaatcattccggatactgcgattttaagtgttgttccattccatcacggttttggaatgtttactacactcggatatttgatatgtggatttcgagtcgtcttaatgtatagatttgaagaagagctgtttctgaggagccttcaggattacaagattcaaagtgcgctgctggtgccaaccctattctccttcttcgccaaaagcactctgattgacaaatacgatttatctaatttacacgaaattgcttctggtggcgctcccctctctaaggaagtcggggaagcggttgccaagaggttccatctgccaggtatcaggcaaggatatgggctcactgagactacatcagctattctgattacacccgagggggatgataaaccgggcgcggtcggtaaagttgttccattttttgaagcgaaggttgtggatctggataccgggaaaacgctgggcgttaatcaaagaggcgaactgtgtgtgagaggtcctatgattatgtccggttatgtaaacaatccggaagcgaccaacgccttgattgacaaggatggatggctacattctggagacatagcttactgggacgaagacgaacacttcttcatcgttgaccgcctgaagtctctgattaagtacaaaggctatcaggtggctcccgctgaattggaatccatcttgctccaacaccccaacatcttcgacgcaggtgtcgcaggtcttcccgacgatgacgccggtgaacttcccgccgccgttgttgttttggagcacggaaagacgatgacggaaaaagagatcgtggattacgtcgccagtcaagtaacaaccgcgaaaaagttgcgcggaggagttgtgtttgtggacgaagtaccgaaaggtcttaccggaaaactcgacgcaagaaaaatcagagagatcctcataaaggccaagaagggcggaaagatcgccgtgtaa
. V/ I7 g1 a% y( E/ L" q# O后面的基因为：/ V- C9 g( S! R6 P/ g
atgga aatatacact tcggataact actccgaaga agtagggtct6 K9 P! T' X' y4 {
      121 ggagactatg actccaacaa ggaaccctgc ttccgggatg aaaacgaaaa cttcaacagg
1 C% V! d4 r6 d/ L+ U      181 atcttcctgc ccaccatcta ttttatcatc ttcttgactg gcatagtggg caatgggttg8 B! I( ~, b5 M! e
      241 gtaatcctgg tcatgggtta ccagaagaag ctgaggagca tgacagacaa gtaccggctg
$ h* b5 N  h- {0 T9 |" u      301 cacctgtccg tggctgacct cctctttgtc atcacactcc ccttctgggc agtggacgcc
, ]% z& O; ]+ F$ U5 P      361 atggctgact ggtactttgg gaaattttta tgtaaggctg tgcatatcat ctacaccgtc
) R; j  V1 ]1 v# E3 @6 f$ v      421 aacctttaca gcagtgttct catcctggcc ttcatcagcc tggaccgcta ccttgccatt
; L: U5 ]& Y; C/ @      481 gtccacgcca ccaacagcca gaggccgagg aagctgctgg ctgaaaaggc cgtctatgtg
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0 _* r4 U2 V  I6 t5 f3 M     1021 tccatgagca gaggctccag cctcaagatc ctttccaaag ggaaacgggg tggacactct, R2 m1 B* t3 C' t1 z$ D" s0 e6 N9 q
     1081 tccgtctcca cagagtcaga atcctcaagt tttcactcca gctaa+ }# v8 z3 J* c
如何设计overlap PCR引物，帮忙设计一下，谢谢。

86964109

设计2对引物，A基因上游和B基因下游正常设计，A基因下游和B基因上游引物分别设计30bp左右，A下游3‘端15bp与A基因末尾15bp一致，5’端15bp与B基因起始15bp互补，B上游引物同理，使扩增后的A基因3‘与B基因5’能够有15bp以上互补配对，分别扩增A，B基因，如果产物特异性好可不回收，按照等分子数混合，先进行一次退火，使AB基因融合，补加A上游和B下游引物，继续扩增融合基因。不知我有没有说明白