msc消化时，细胞竟然没有变圆

caiyu07248

前两天做脐带MSC培养时，原代培养感觉长得还可以，细胞长到第三天已达到80%（如图），但是消化传代时，消化了5min，细胞还没有变圆，然后我又消化了5min，但是细胞还是没有变圆，我也不敢再消化了，就用枪吹打了几下，结果细胞都脱落下来，但是形状还是梭行的，并没有变圆，然后我就直接吹下来，收集离心，接种后，第二天大多数细胞都是悬浮的，贴壁的细胞很少，细胞应该是都死了吧。请各位大侠赐教，我的细胞时怎么啦？

caiyu07248

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% Q. i' v; D" }吹打后，细胞都脱落了，大部分都漂着，有少部分顽固分子还贴着，亮点应该是血细胞

caiyu07248

回复 ditiger 的帖子
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8 C6 h# }% s9 C4 n/ _用得是专门的MSC消化液，以前用都很好，这次不知道是怎么回事？消化前有用Dpbs洗了两遍的

caiyu07248

回复 ljs 的帖子
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受教！谢谢！

caiyu07248

回复 prophe 的帖子
$ @9 ?- p1 Q' u
# [4 M4 z1 H# U, f* p, G消化前用DPBS洗了两遍了，以前也是这么消化的，没有出现这种状况。因是原代培养，应该会有些杂质，血细胞比较多。我得再试一遍消化液，谢谢！！

caiyu07248

回复 回到从前 的帖子* r' A5 u0 X' M( J9 J

* _( z9 c  S7 b用的是专门的MSC消化液，可能从-20里拿出来有一个多月了吧。我怀疑可能也有这个问题。细胞消化后计数时，用台盼蓝染色，看着应该是活的。

caiyu07248

回复 lmh_yixue 的帖子
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  k& ~4 ?' W4 w* F谢谢！到时候实验一下

caiyu07248

回复 yangwy028 的帖子  R. W% G/ J: R/ R; {5 z2 Z  [/ o
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从脐带中提取的MSC，原代培养到第三天时，细胞就是照片中的样了，漂浮着的是应该是血细胞，照片可能拍得不清楚，细胞也就大概长到80%。细胞长到80%时，吸弃上清，用DPBS洗了两遍后，加0.5ml的MSC消化液（不清楚是不是胰酶，以前都用这个没有出现问题），室温下5min,细胞没有变化，然后我就放于培养箱中又是5min,细胞还没有变圆，觉得不对劲，就加了DPBS用枪吹了几下，镜下观察发现，细胞都脱落了，但是还是有很多细胞形态是梭形的，没有变圆就直接从壁上掉下来了。我就直接吹落收集，离心，再接种，第二天大多数细胞都漂着，仅有少数的几个细胞有贴壁。

caiyu07248

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谢谢，我怀疑是消化液的问题，我后来用胰酶消化后，细胞消化形态也正常了，也正常贴壁了。