msc消化时，细胞竟然没有变圆

caiyu07248

前两天做脐带MSC培养时，原代培养感觉长得还可以，细胞长到第三天已达到80%（如图），但是消化传代时，消化了5min，细胞还没有变圆，然后我又消化了5min，但是细胞还是没有变圆，我也不敢再消化了，就用枪吹打了几下，结果细胞都脱落下来，但是形状还是梭行的，并没有变圆，然后我就直接吹下来，收集离心，接种后，第二天大多数细胞都是悬浮的，贴壁的细胞很少，细胞应该是都死了吧。请各位大侠赐教，我的细胞时怎么啦？

qilan2012

吹打之后梭形的细胞在镜下能漂动吗？轻轻晃下培养瓶，如果能说明你培养的不是间充质，是杂细胞吧，图片不太清楚，亮点是血细胞？...

ditiger

用0.05%的胰酶,消化前得用PBS洗两遍。

ljs

1.怀疑楼主的消化细胞的操作。楼主可以将细胞从新接种，等到融合至80-90%时，消化细胞，加入消化液后，均匀吹打，边消化边吹打，观察细胞是否成团，是否消化成单个的细胞，形状是否变圆。
. l. d' q/ s1 ~7 y$ U) i2.一楼说的杂细胞也是一种可能，但是可能性不大。
, [6 s, t. t8 l/ b3.楼主描述的细胞死亡，可能是因为楼主消化时间过长造成的。

prophe

从您的细胞图片显示可能受到污染，杂质较多，细胞消化时细胞没有变圆，首先考虑您的消化操作方法问题，如培养基有没有洗干净，再次考虑你的细胞状态，最后考虑你的试剂如胰酶质量问题！

回到从前

你消化不下来细胞有一下几个原因
" n% V% c. V3 z6 y: _+ ]9 _1 n7 J3 [1 你用的是胰酶消化的吗？胰酶配置多久了？是新配置的吗？浓度多少？
3 u1 B8 u: M7 L, u& j7 p# o/ j: D2 你的细胞是什么来源的间充质？如果胰酶没问题的话考虑是杂细胞
( U# L+ f% r8 q5 o; P( d$ a3 细胞在消化的时候是否为活细胞？

lmh_yixue

我用0.25%胰酶消化细胞有时候消化30Min才下来，最后传的也很好。开始的时候我也像你一样不敢消化时间长，5min后就吹打，基本上是使劲吹下来的，结果传代很不理想。现在我就等到细胞变亮变圆，晃动可下来一些的时候再终止消化，传代效果不错。

caiyu07248

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' _5 I" A$ I4 a2 x9 ~
, Y6 ^8 R5 a. Y' ?2 {吹打后，细胞都脱落了，大部分都漂着，有少部分顽固分子还贴着，亮点应该是血细胞

caiyu07248

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* S  B; c- ^- F! {- G
& I& a$ s" B8 K$ L+ m, A# t用得是专门的MSC消化液，以前用都很好，这次不知道是怎么回事？消化前有用Dpbs洗了两遍的

caiyu07248

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6 K* V* t5 l" n
0 X* U( w, m0 O  y+ N# v0 b" ]受教！谢谢！