msc消化时，细胞竟然没有变圆

caiyu07248

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消化前用DPBS洗了两遍了，以前也是这么消化的，没有出现这种状况。因是原代培养，应该会有些杂质，血细胞比较多。我得再试一遍消化液，谢谢！！

caiyu07248

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( F  }/ K: k- Y2 h4 A: t用的是专门的MSC消化液，可能从-20里拿出来有一个多月了吧。我怀疑可能也有这个问题。细胞消化后计数时，用台盼蓝染色，看着应该是活的。

caiyu07248

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谢谢！到时候实验一下

Demon_CN

首先你要确定你是用的胰酶消化的么，
  N. @/ N' r1 W其次胰酶的浓度，有效期5 Z, m% o1 B2 Y( ?" q
然后你消化前是否用盐水或者pbs冲洗了残余培养基。

jihaijie

贴壁细胞的培养常常在消化出问题,每次消化时间把握好,如果5分钟细胞还没有变圆,立即加入PBS,换用新的消化酶.否则你等半个小时,细胞状态就不好了.

deshenglll

部分细胞长过了是很难消化的，所以要及时的处理细胞。建议细胞融合度85%就要处理了。好像细胞状态不是很好啊。

small

消化时胰酶的温度也会影响细胞的消化，

yangwy028

从图片来看楼主的细胞长得过密，而且这批细胞还貌似很不纯了。这样你的消化酶就无法有效的和细胞进行接触。其实并不是消化不下来，而是无法真正的接触并发挥作用。你的细胞是脐带的MSC吗？上边漂浮的是什么东西？你原代三天能长成这个样子么？请予以更详尽的描述。扔掉总结总结经验再换一批养吧。

caiyu07248

回复 yangwy028 的帖子6 i' y. q9 z9 B
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从脐带中提取的MSC，原代培养到第三天时，细胞就是照片中的样了，漂浮着的是应该是血细胞，照片可能拍得不清楚，细胞也就大概长到80%。细胞长到80%时，吸弃上清，用DPBS洗了两遍后，加0.5ml的MSC消化液（不清楚是不是胰酶，以前都用这个没有出现问题），室温下5min,细胞没有变化，然后我就放于培养箱中又是5min,细胞还没有变圆，觉得不对劲，就加了DPBS用枪吹了几下，镜下观察发现，细胞都脱落了，但是还是有很多细胞形态是梭形的，没有变圆就直接从壁上掉下来了。我就直接吹落收集，离心，再接种，第二天大多数细胞都漂着，仅有少数的几个细胞有贴壁。

Donnies

应该是细胞都死了，是不是你的培养基换错了还是培养基已经放了很久了，这样的话细胞就是由于环境的不适合导致无法贴壁，另外有一个建议，细胞长2-3天之后，如果长到80%-90%即可传代，传四五次之后更换新的培养瓶。