成骨诱导液配置问题，怎么灭菌？

ygxdnh

最近做诱导MSC成骨，配了成骨诱导液，但是加了诱导液的全部染菌。- ^& t0 H: [7 O  k- @5 |
配置方法是：
* T& D7 n9 q3 p5 R7 \8 j9 v( ~1、按比例称VC和B-甘油酸钠（下面用B代替）) O2 D5 m. L0 U
2、DEX溶于酒精
: p" I! ~* ?5 Z5 Q6 [" V% n: E3、在α-MEM中加入VC，B,及DEX，这时培养基变黄（不知道大家配出来是否是黄色），再用0.2mm的过滤器过滤。
# J% r" d. W+ D0 Z最后加入孔板。但是都染菌了。大家配置诱导液是怎么灭菌的，按道理说用了0.2mm的过滤器应该不会染菌吧？

cartoonyang

操作原因的可能性很大，你应该仔细会想你自己操作的每一步，包括所用的瓶皿，移液枪等。。。

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$ d  U# Z6 }" F
& m! H8 T, |9 |8 J  ?% L哦 我们这边做MSC的

sdyinong

回复 ygxdnh 的帖子3 c  L0 A. T/ o2 r# @8 V) c# `2 z

& Q7 \0 x0 Z; H, _% _按照道理说也可以，不过可建议你每一种液体都过滤一下再混，细胞实验还是以稳妥为主，如果觉得每次配需要的试剂量不多，你可以将VC,B,DEX等都先各自过滤到无菌的管子中，-20摄氏度保存，用时融化加样即可；诱导培养基培养基也可以多配一些，不过最好一周内用完。

stang198651

我们原来是用重复使用的滤器。用完之后清洗晾干，用时清洗，用超纯水泡滤膜，做好之后用注射器推注空气试验漏气或穿孔没有，合格的再用铝箔纸仔细包装再灭菌，灭完之后自然冷却不排气，然后直接拿出来，不烘干，用时小心打开滤器上端铝箔纸，再用注射器试验漏气或穿孔没有，合格的进行过滤操作，过滤完之后再用注射器试验漏气或穿孔没有，然后再做无菌试验，过滤N次，一次没有污染过。

ygxdnh

jenvy121 发表于 2012-11-8 14:23 4 z% g- q  [# p8 r& D7 c
0.22滤器过滤不会污染了，肯定是操作过程中出现了问题，亦或是你的过滤就是不正确的操作导致溶液污染，先进 ...

/ ~* a  \" Z) m/ r1 D5 ~! v
谢谢

ygxdnh

回到从前 发表于 2012-11-8 12:43 5 D# x9 q9 u9 e# e) s* U" X& }
你好 还做别的鉴定吗？

& ^( G) R* S4 ?9 G3 m
没有，我们这边主要做材料，细胞只是做个评价，没有做那么多鉴定。

ygxdnh

stang198651 发表于 2012-11-8 12:34
+ l! F3 Q% d. ~7 n; L按理论过了0.2um就无菌了，但在实际操作中会存在很多意外，一般情况下，过滤完最好能做个无菌试验，以确认无 ...

1 C- {+ I! [1 E8 g6 n我也觉得可能是操作原因。

ygxdnh

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+ {1 X2 }) B7 \! h. z
6 m1 k5 n9 k3 W2 @$ `7 s: o; W如果我把VC，B，DEX都溶于PBS（少量），然后再过滤，最后加入到无菌的培养基里面，可否？

jenvy121

0.22滤器过滤不会污染了，肯定是操作过程中出现了问题，亦或是你的过滤就是不正确的操作导致溶液污染，先进行菌检在进行染色比较靠谱。