第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

没有过筛，剪完消化后直接装T75培养，很多组织块还贴在瓶壁上，还有细胞好杂啊，细胞形态也不均一，我三个胚胎一个瓶，长得真快，过夜就的消化了，不知道怎么处理，尤其怎么去除那些组织块。
- |2 U' L. C0 {% q" Q还有大侠们帮看看分得细胞。
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jun8013

最后一个应该是就是组织块0 B9 X: x- N8 t' |, V- j
请教，下面怎么消化传代，主要想去除这些组织块，或者对后面实验有无影响。
7 y4 q& C( K8 p0 H/ g) {大家帮看看这MEF对吗，状态如何。

jun8013

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. E6 }1 T: O& M0 T+ N' m4 E, ~回复 huangcong1988 的帖子
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谢谢大侠指教，第一次分，也是在论坛上搜得，分离躯干时，剪的比较狠。。。。。感觉四肢难剪。。。。所以剩下的比较少，就三个一个T75，今天发现满了，打算穿下代，看看状态，那个是用10倍物镜看的。。。求指导

jun8013

回复 huangcong1988 的帖子
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3 B- ?# Q* E  V# s& M) }用PBS洗了5次，感觉壁上还粘着些，打算消化时自然沉降一会试试

jun8013

回复 dilal 的帖子* f8 ]) Q  \- X$ J
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十分感谢指导~还有想请教下，P1保种好，还是P2好些。一个T75包几管合适。。。。

jun8013

回复 Donnies 的帖子
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: a% k/ t: ?! m0 {谢啦O(∩_∩)O~发现MEF长得好快啊，，，，，我几乎一天就的传。。。。

jun8013

回复 南宫燚岚 的帖子
: F4 t* {: f, E  N5 R2 L$ U9 A* `* O" x/ T# x
我三个胚胎一个T75发现第二天就满了，就消化了，组织块用PBS洗了5次，感觉少了，不过后面消化传代发现是几乎没有了，所以慢慢消化看样是可以的，不用过目筛。- l1 R" J# I7 B$ X
我培养基90%DMEM+10%FBS+2mM L-glutamine+P/S
* J& R7 F+ m5 D* e" ?7 y全部过滤除菌，P/S Glutamine买成品，没过滤直接加

jun8013

回复 huangcong1988 的帖子. t! }/ ^/ W$ a" K) R2 v* e

8 W3 z4 A3 v# o. S% ^0 M原代没冻现在打算没代就动，长得太快了这MEF

jun8013

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1 v8 ?  l8 L. |$ _回复 huangcong1988 的帖子, V. W- q6 y! c! c9 o
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太好了，收藏下。请问前辈，您胰酶消化时用多少浓度的0.05%还是0.25% 。还有消化时有一些没消化下来的，感觉还不少，4倍镜下看，这些细胞还要吗？是不是老点的细胞难消化啊+ L) c- I( D# [1 N8 T  j4 r
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0.05%消化多久，我感觉我消化了快5min钟

jun8013

回复 南宫燚岚 的帖子
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您意思是热灭活？买的进口的，应该还是要热灭活一下，说的有道理！下次灭活下看看