第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

没有过筛，剪完消化后直接装T75培养，很多组织块还贴在瓶壁上，还有细胞好杂啊，细胞形态也不均一，我三个胚胎一个瓶，长得真快，过夜就的消化了，不知道怎么处理，尤其怎么去除那些组织块。- L' ~2 ^& j" t2 S) D: h
还有大侠们帮看看分得细胞。( j. g# l0 @/ J: b9 S7 }

labghost

回复 jun8013 的帖子; q! s' |& S! f- [- t: O
: c$ F4 Z7 k: V: v" X
不是，感觉是培养皿是脏的还是怎么的，觉得你这成纤维细胞状态不对啊。

南宫燚岚

* U: X4 t1 O! A; M1 O0 r* D0 R; C  A
5 T3 G9 b& u2 x/ W  t消化下来的细胞完全够用了，所以瓶底那些没掉下来的扔掉就可以了。* D* U4 W- P, W+ w
另外，不要让MEF长得太满，100%已经是上限了，只要90%以上就能传代，如果你发现MEF长得很快的话，那在传代时可以采取1:3以上的比例，然后舍弃一部分呗。
; z0 e5 C) \) [3 R这是我分MEF时的图片：（不知为什么你们的都是紫色的？是CCD的关系么？）
% E, ?& B5 ]; C- L% m
; v$ v: G$ E" ?) r8 J; u; L分完第一天，因为是体视镜分离，去头尾四肢，所以细胞数比较少
, H3 x6 c+ m6 U- t

2012-11-14 08:56 上传

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' ^0 y: p) I- x2 e* z* {3 d
第二天就长起来了# N6 ~9 e1 V8 k9 @+ R' |7 S

2012-11-14 08:56 上传

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2 u$ p; P2 _8 {& _第三天就该传代了& B' t" N0 `, q: ]& F/ l) H

2012-11-14 08:58 上传

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原代第三天，需要传代了

" O+ A) s# ~+ Q4 m
+ N7 l# p' `4 Q* r( _两代过后，细胞纯度有所改善) T* c9 M2 a' J3 `

2012-11-14 08:58 上传

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传代两次后

huangcong1988

回复 jun8013 的帖子- {% ~/ `1 E  e6 }/ B, H4 c
, s- B1 r: [, _% ]5 T
你是说消化传代还是说分离细胞的时候？传代的话，5min太长了，消化的话5min就太短了，所以你分的细胞少。浓度都可以的，0.05跟0.25差不多，组织块多就用0.25.少就用0.05，主要是控制用量，还有消化时间，我一般是10ml左右胰酶，20min，一只母鼠

zhusealin

有组织块也不要紧，随着后面传代会逐渐消失的。MEF需要密一点生长

jun8013

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" y* b+ [3 u- v7 |' g8 y+ @  u  V; I0 V4 g4 q# p* W
您意思是热灭活？买的进口的，应该还是要热灭活一下，说的有道理！下次灭活下看看

jun8013

3 T8 H9 a9 B8 F1 F2 p& \

, A9 `8 G) a1 @' L+ k回复 huangcong1988 的帖子
( F$ }: [) E% {' m( E/ g  g7 r, B% S0 r% W* X3 G1 A! G. V& S$ e/ \- C  \
太好了，收藏下。请问前辈，您胰酶消化时用多少浓度的0.05%还是0.25% 。还有消化时有一些没消化下来的，感觉还不少，4倍镜下看，这些细胞还要吗？是不是老点的细胞难消化啊% k/ x( v3 V- X& @" W
5 Y1 R( l1 Y) s; X0 F( K; a: N
0.05%消化多久，我感觉我消化了快5min钟

南宫燚岚

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& R( y/ m% t/ V: ^) ?0 X% {4 z4 E* i8 F/ H% H2 M
FBS最好灭活一下

huangcong1988

回复 fwj81 的帖子) K) U+ M2 D0 c  ~1 C' `$ F- m+ R
9 H0 g; Y3 d7 L3 p
这是我上次分的

huangcong1988

回复 fwj81 的帖子# v; V$ s; r* j0 f. u/ a5 Q

3 f) t) y/ m) A0 X' k: q4 E10倍镜下看的么？还是有点杂，感觉。