第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

没有过筛，剪完消化后直接装T75培养，很多组织块还贴在瓶壁上，还有细胞好杂啊，细胞形态也不均一，我三个胚胎一个瓶，长得真快，过夜就的消化了，不知道怎么处理，尤其怎么去除那些组织块。
3 G' O8 }( ?% Q还有大侠们帮看看分得细胞。, r0 u$ w( m' _# D: U

jun8013

最后一个应该是就是组织块$ J' S/ K; \$ \( \& g5 f
请教，下面怎么消化传代，主要想去除这些组织块，或者对后面实验有无影响。6 h! u: e; g5 W
大家帮看看这MEF对吗，状态如何。

jun8013

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3 a5 m% W2 w: X; Z) ^* k1 |  x回复 huangcong1988 的帖子- o/ V) X8 K: U" x8 J

% s- [# v4 W) H$ q$ _6 N/ s谢谢大侠指教，第一次分，也是在论坛上搜得，分离躯干时，剪的比较狠。。。。。感觉四肢难剪。。。。所以剩下的比较少，就三个一个T75，今天发现满了，打算穿下代，看看状态，那个是用10倍物镜看的。。。求指导

jun8013

回复 huangcong1988 的帖子! ^* a) G, R+ B! G3 C7 T- p

1 V+ {) B6 D% A7 l' j: ^用PBS洗了5次，感觉壁上还粘着些，打算消化时自然沉降一会试试

jun8013

回复 dilal 的帖子
+ M+ q* M. s. g3 |1 A; L4 W
8 A8 h3 h: y/ V6 y5 k十分感谢指导~还有想请教下，P1保种好，还是P2好些。一个T75包几管合适。。。。

jun8013

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谢啦O(∩_∩)O~发现MEF长得好快啊，，，，，我几乎一天就的传。。。。

jun8013

回复 南宫燚岚 的帖子* _! n0 y: f0 \0 f
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我三个胚胎一个T75发现第二天就满了，就消化了，组织块用PBS洗了5次，感觉少了，不过后面消化传代发现是几乎没有了，所以慢慢消化看样是可以的，不用过目筛。8 _9 f& |0 M  @) b* l' \
我培养基90%DMEM+10%FBS+2mM L-glutamine+P/S ; c# T; p3 }- x
全部过滤除菌，P/S Glutamine买成品，没过滤直接加

jun8013

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- S7 ^+ Z) q( p8 a8 X; a/ X0 }) I% ~1 B, ^5 U: W5 m
原代没冻现在打算没代就动，长得太快了这MEF

jun8013

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0 `7 @9 x( x- U- M' Z- \回复 huangcong1988 的帖子
# C% j9 B& Y) z1 e* |1 I
* @  F9 L! k: \# o/ k) i太好了，收藏下。请问前辈，您胰酶消化时用多少浓度的0.05%还是0.25% 。还有消化时有一些没消化下来的，感觉还不少，4倍镜下看，这些细胞还要吗？是不是老点的细胞难消化啊5 T6 H$ L/ e3 g* J( g: b

2 p; [( l, f) n0.05%消化多久，我感觉我消化了快5min钟

jun8013

回复 南宫燚岚 的帖子" X, r2 a, M2 g8 q" Q

; p9 f2 N! i1 g5 \. b3 v. Z您意思是热灭活？买的进口的，应该还是要热灭活一下，说的有道理！下次灭活下看看