MSC这种状态如何预防及处理

wbs1986

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上个月倒是换过不同公司的培养基，后来考虑到会不会是这个原因，又换了进口的DMEM，还是会出现，而且用同样的培养基，有的细胞没影响，有的细胞就这样。出现这种情况的细胞原代都很好，10-14天就长满，然后传代后有的细胞梭形两侧在显微镜下观察会有亮点，感觉就状态不太好了，然后就慢慢出现黑色颗粒，原代照片暂时还没有。细胞类似浓度以前也试过没什么问题，不过这黑色颗粒倒是跟接种密度有点成反比的样子。

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回复 cartoonyang 的帖子
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  w! l) ~/ `7 ^( z# n' K第三种抗生素一般用什么，现在实验室有两性霉素B，不知道有没有用

wbs1986

回复 sdyinong 的帖子: o+ ~, [! L* h* N# X) T8 o
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传代时细胞数目可能是一方面原因，我同样的两瓶细胞传代和接种到孔板和另外的培养瓶，孔板里细胞较稀，就出现这种情况，而另一瓶细胞接种较密，3天就长满，这种黑色颗粒也很少，状态还可以。但是以前也经常接种到孔板的时候较稀，也没有出现过这种情况，就上个月出现到现在一直有

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回复 lql2006wh 的帖子) J" G6 [6 N7 d4 j, R

7 ]- }/ u7 Y" l) L+ ?( d, h就我自己养的细胞也有不同批次对同样血清同样培养液下不同的状态，有的细胞状态还可以，有的就出现这种很多的黑色颗粒，细胞很快死亡。

wbs1986

回复 huajie881026 的帖子- q1 `: v; _: |; T( k

9 Q, N/ ~( R5 Y胰酶消化最近都1min之内的，而且胰酶消化时PBS洗了之后留了1ml，然后胰酶加1ml。我之前做过药物诱导的衰老和复制性衰老，形态都不是这个样子，只是胞内颗粒增多，而且能维持很长时间。现在这种状态过几天细胞就死了，感觉好像细胞膜破裂，然后细胞间也有很多颗粒

deshenglll

细胞不是很好啊。

lovesxj941

我建议还是从空培养开始，检查一下培养基，还有建议让大家看一下原代照片，好有个比较。如果本身接种细胞浓度很低的话，很有可能成为这个样子。

安lisha

回复 sdyinong 的帖子" ?$ E& C+ C1 W, Z0 ^4 }4 D# i( I

! R$ N8 @5 K1 p- `麻烦问一下T75的培养瓶传代时合适的细胞数目是多少呀？

sdyinong

感觉细胞可能老化，是不是传代时细胞数目太少了，

caiyu07248

我发现我原代培养的时候也有很多这种脏脏的东西，不知道是什么，但是慢慢换液后，传代后就好了，不过我加了预防支原体的抗生素，不知道是不是这个原因。