关于肿瘤细胞球蛋白的提取 - 肿瘤干细胞专区干细胞之家



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cxscxs

新手上路

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楼主

发表于 2012-11-24 19:12 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

无血清悬浮培养肿瘤细胞球，如果球养出来了，想提蛋白做WB，提蛋白的时候如何把细胞球与周围散在的单细胞分离开？还有，需要多少球才足够做WB？请有经验的前辈多多赐教，谢谢

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沙发

发表于 2012-11-26 15:30 |只看该作者

同问题啊。。。啊有人回答呢

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李夏

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小小研究员

藤椅

发表于 2012-11-27 14:58 |只看该作者

我也好想知道这个问题啊，求高手啊- J4 O! \5 Z1 E/ v; [

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jack0811

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板凳

发表于 2012-11-28 11:28 |只看该作者

我一般是400g离心10分钟就可以把球离下来了,然后再做后续试验

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cxscxs

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报纸

发表于 2012-11-28 15:55 |只看该作者

回复 jack0811 的帖子% J$ Q# Z# s+ y3 e V9 t
! V( I, N" C' e( M% X2 H
单细胞不会离下来吗？

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cxscxs

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地板

发表于 2012-11-30 16:39 |只看该作者

就这么沉了？求助啊，大家球养出来都不做WB啊。。。

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617507911

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7楼

发表于 2012-12-1 15:36 |只看该作者

回复 cxscxs 的帖子! }; L# P8 T& L1 M a

这个应该和平时做WB的蛋白量一样吧，平时WB上样量大概在100UG左右吧，所以你可以做做预实验来确定蛋白量，从而确定你自己制蛋白需要多少细胞。假如想显细胞内的蛋白那就可以直接用胰酶，假如细胞外的话我想应该用些比较温和的酶，不建议用胰酶