求脐带间充质干细胞酶解法

xuzhijuan1989

查阅相关文献说脐带酶解法用胶原酶和胰蛋白酶先后各消化30min，想请问下，胶原酶消化后需要离心吗或者怎么去掉胶原酶？消化后的液体很粘，很难过滤，请问应该怎么解决？过滤选择怎样的滤器比较好呢？现在用的是300目的，感觉效果不是很好，望各位前辈指教，谢谢！

mkhorse

脐带细胞我们都是用组织块法，感觉还是比较简单的。可能比消化法培养原代时间会长一点。用酶消化后应该是要洗涤、离心将酶去除吧。

caiyu07248

胶原酶当然是通过离心去除掉，消化完后过滤用300目的也太难过滤了吧，我用的是200目都觉得比较困难，我的经验是，过滤前先用PBS冲洗组织块，然后离心，将上清倒掉，这时候上清很粘，倒的时候不要将上清全倒了，因为组织块离得并不是很紧，留下一些，防止把细胞也倒了；重复一遍，第二次去上清后，加入适量的pbs洗一下，然后再进行过滤，觉得这样会好很多，不会那么粘了。

回到从前

我们用的200目的，感觉还可以吧，你用的胶原酶几型的呢？

xuzhijuan1989

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胶原酶2，可能是300目太小了吧

xuzhijuan1989

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2 Z; E: m. P8 ~- l谢谢

xuzhijuan1989

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呵呵，你的这种方法看来挺好的，谢谢啦!

弑之使徒

用点PBS缓冲液来稀释，再用200目过滤吧，这样会轻松点的~

弑之使徒

用点PBS缓冲液来稀释，再用200目过滤吧，这样会轻松点的~

452359357

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我们直接用100目的过滤， 要中和胶原酶 胰酶直接加1-2ml的血清就可以了 不用离心的