做流式鉴定的抗体可以做免疫荧光？？？

huajie881026

今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的抗体可以做免疫荧光吗？查了BD的网站，有的既可以做流式又可以做荧光，我买的抗体上面只写了流式，这样是不是说明不能做了呢？做流式的抗体和做荧光的抗体有什么区别吗？？？在此请教！

sun_happone

流式抗体比较容易淬灭。做免疫荧光的话，在同等条件下，当然选择做荧光抗体啦，但实在没有，流式抗体还是可以用的，不过最好马上去荧光显微镜下看结果，时间长了不是很好。我用过流式抗体做荧光染色，效果还可以。

huajie881026

回复 sun_happone 的帖子; l' e8 o/ M2 @

6 o5 M! m" ^" z& _4 T/ {5 k' [请教具体步骤怎样？7 Q. p/ j  N  K$ X4 U# I/ W

huajie881026

回复 huajie881026 的帖子
3 Y: S. T- X: g" ], m; C: G2 w" O6 [; A* U4 s" |! F1 b
用4%PFA固定细胞10min，PBS洗3次，然后1%BSA封闭1h，再用抗体标记可以吗？
8 L8 o. ~2 G3 ?4 o; V, R% u如果我需要用DAPI染核岂不是要用Triton-X100破膜处理？

meister

回复 huajie881026 的帖子
* c( V2 f6 B8 B7 J8 B# m) E9 ~. q/ @0 b0 V! Y& Y  l
当然可以了， 不过荧光抗体不一定能做流式

meister

回复 huajie881026 的帖子
; F& @& ^0 t; i0 D7 i- T' V; H9 x& ~7 v  O4 N# L4 p
PFA固定，都要破膜处理

sun_happone

回复 huajie881026 的帖子
6 e' Q& b8 N- z5 C9 T. h6 L& _2 O! @3 |2 x0 U5 a4 Y& k
是否要破膜，要看你在膜上表达还是在核内，如果在膜上，就不需要破膜，染DAPI不需要破膜的，另外，封闭的话做好用3%BSA，有血清BLOCK更好。

huajie881026

回复 sun_happone 的帖子
+ m3 C" {/ s: \8 T1 N
" W+ L+ j8 ~4 R% Z) V那抗体稀释比例多少较好呢？

sun_happone

回复 huajie881026 的帖子9 J" P2 V& ?- V& a4 |

7 k# Q% u, @% b5 T5 i  ?这个看说明书就好了，没有特定的稀释比例的，每个抗体不一定一样。

receiver1

流式和免疫荧光的原理是相同的，做流式的抗体一般可以用于免疫荧光。但由于流式抗体很多都是直标的，抗体直接带标记，因此容易淬灭。而普通抗体选用二抗，实际上有一定的信号放大作用，信号相对较强。当然如果流式抗体不是直标而是选用二抗的话，那就一样了。我一般不用直标的抗体，而是自己根据流式细胞仪的信号通道选用抗体，因为有的时候需要同时用几种抗体，间标（用二抗）的选择起来灵活些。