同时提取DNA和RNA

bb6120

不知道有没有大侠同时从细胞中提取DNA和RNA不？小弟最近用TRIzol同时DNA，RNA。DNA的提取效果一直都不好，降解严重。恳请各位大侠支招！！！！或者还有什么其他方法可以同时提取DNA和RNA吗？2 C  B: \$ j: W/ |3 {8 }
先谢过各位大侠！

86964109

回复 bb6120 的帖子
; m* b" y) m* g0 Q( U5 L+ E! N$ a8 T9 m+ K% A+ U
我们也是trizol法 参照http://refer.biovip.com/doc-view-9190.html做的，DNA部分基本只用醇沉就好了，收率还可以啊

452359357

你可以讲样品裂解后分成2分 一份提DNA 一份提RNA   也可在提RNA时 从第三步离心后的沉淀中提取DNA （这步含DNA较多）

bb6120

回复 86964109 的帖子
; K+ x- j, U3 S' v; k1 f6 m2 s6 j$ Q. g  e. }; s# E& b. Y
这个步骤我也有的，我也是参照这个步骤，但是提出来的DNA到最后都是有降解的。你们提的DNA没有降解吗？能给我说一下你们的一些细节吗？比如说，pH为8.5的0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇），你们是怎么配的，怎么保存？先谢过！

bb6120

回复 452359357 的帖子0 n* q8 y9 G6 @7 j

6 [1 B% ~9 H, G2 M7 Z& b' h关键不是样品的问题，是我最后提出来的DNA质量不好。就算同时裂解两份，最后的操作步骤还是一样的。所以并不是裂解的问题。

86964109

回复 bb6120 的帖子# v7 q- R1 U: }1 ^

4 m: ^% ^# S* P" A' Z* ]9 e0 [我们沉淀DNA一般只用无水乙醇（DNA溶液：无水乙醇 =1:2），如果额外加的话会加3M醋酸钠（30μl），醋酸钠是正常溶解的，保存于室温或4度，能用好久

bb6120

回复 86964109 的帖子
: h3 o- L& n1 o$ x
0 A, g" x$ P0 g7 e( P* t& ^7 s- ^' ]' M你们不是按照TRIzol说明书来做的吗？能给一个详细一点的修改后的步骤吗？先谢过！！！！

86964109

回复 bb6120 的帖子4 m9 M/ e* e& C# s
/ m' P3 p4 t: |/ [
有些记不清了，不过我们做的应该很简单，氯仿处理离心分层后，移去上层水相，用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2～8℃12000r离心5分钟。 ! T5 d' w4 w. y& k' x9 x  `
　　2. 移去上清，（如需分离蛋白质，可保留）用无水乙醇沉淀DNA。每用1mlTRIzol加入1ml无水乙醇，-20放置2h以上，2～8℃12000r离心10分钟，弃上清。 % n2 O0 x8 b2 W- O" c/ P
　　3. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml TRIzol加入0.3 ml75%乙醇，2～8℃2000r离心1分钟， 吸弃上清。
; H$ m, E6 M4 E' }　　4. 室温放置晾干DNA 5～15分钟，用ddH2O溶解DNA。

bb6120

回复 86964109 的帖子
6 k7 ?, O! p# W: F+ o4 ~" F$ `9 R# ]
8 N: {$ C  P9 c5 F9 m( m  E$ }哦，谢谢啦！我按照你的方法再试试！！！真的非常感谢！！！！