同时提取DNA和RNA

bb6120

不知道有没有大侠同时从细胞中提取DNA和RNA不？小弟最近用TRIzol同时DNA，RNA。DNA的提取效果一直都不好，降解严重。恳请各位大侠支招！！！！或者还有什么其他方法可以同时提取DNA和RNA吗？6 _' R% D6 e) z
先谢过各位大侠！

86964109

回复 bb6120 的帖子. \9 O% r- L2 L& y
6 H$ P/ Z- ]( L; P; {! D. H
我们也是trizol法 参照http://refer.biovip.com/doc-view-9190.html做的，DNA部分基本只用醇沉就好了，收率还可以啊

452359357

你可以讲样品裂解后分成2分 一份提DNA 一份提RNA   也可在提RNA时 从第三步离心后的沉淀中提取DNA （这步含DNA较多）

bb6120

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* y* J: z; ]) U. |% V6 l- {7 h3 x, T1 H3 J
这个步骤我也有的，我也是参照这个步骤，但是提出来的DNA到最后都是有降解的。你们提的DNA没有降解吗？能给我说一下你们的一些细节吗？比如说，pH为8.5的0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇），你们是怎么配的，怎么保存？先谢过！

bb6120

回复 452359357 的帖子0 w! }3 j/ l' d: Q' \* |

9 M7 l1 H$ A; T/ H3 B9 M; w8 l# o关键不是样品的问题，是我最后提出来的DNA质量不好。就算同时裂解两份，最后的操作步骤还是一样的。所以并不是裂解的问题。

86964109

回复 bb6120 的帖子$ m+ K: Y, G7 o$ C3 H; M2 t6 K* e

* ?7 T4 O4 ~: V0 p. ~; x我们沉淀DNA一般只用无水乙醇（DNA溶液：无水乙醇 =1:2），如果额外加的话会加3M醋酸钠（30μl），醋酸钠是正常溶解的，保存于室温或4度，能用好久

bb6120

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) S* M; @" O0 f3 |. i& Q9 J/ y/ p5 A3 n4 O0 |  z! O, R( ?
你们不是按照TRIzol说明书来做的吗？能给一个详细一点的修改后的步骤吗？先谢过！！！！

86964109

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' |# L5 x! y) @% \/ Y3 x) x4 V* Q
# ~/ D; x0 o4 `; s- y1 Q! O有些记不清了，不过我们做的应该很简单，氯仿处理离心分层后，移去上层水相，用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2～8℃12000r离心5分钟。 ! g: `* F( o. |# U' }* y
　　2. 移去上清，（如需分离蛋白质，可保留）用无水乙醇沉淀DNA。每用1mlTRIzol加入1ml无水乙醇，-20放置2h以上，2～8℃12000r离心10分钟，弃上清。
4 {* E7 J0 ]# s　　3. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml TRIzol加入0.3 ml75%乙醇，2～8℃2000r离心1分钟， 吸弃上清。
: C8 }% _  ]2 ^. m- E　　4. 室温放置晾干DNA 5～15分钟，用ddH2O溶解DNA。

bb6120

回复 86964109 的帖子. D' L, I$ E6 t& q0 t0 z
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哦，谢谢啦！我按照你的方法再试试！！！真的非常感谢！！！！