造血干细胞的鉴定

AIR-JPC

在经历了密度梯度离心法获得Mononuclear后，再用MiniMACS 分选获得的CD34+细胞后，是否就已经获得了传说中的造血干细胞，还需要进行造血干细胞的鉴定吗？谢谢

Jonathan

请参考一些文学。CD34+只是血细胞里面的一个细胞群，细胞类型复杂，只是都表达CD34+，具有一定干细胞的特性，所以在ips方面效率很高。

goblinwang

你查看下文献，我记得CD34阳性细胞好像只是造血祖细胞，而CD34阴性或low的细胞好像才是干细胞，，这篇文献有相关介绍，可以参考下，

AIR-JPC

谢谢前辈们的指导！

wwy551

回复 AIR-JPC 的帖子4 }) }- G! \' ^; |; Z" }8 h- A
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到目前为止还没有哪个单个的marker就能label出来造血干细胞，相关文献里面有很多常用的用来富集造血干细胞的，而且常常联用好几个marker，不过即使这样也仅仅是富集，比如CD34+细胞里面可能也只有0.1%到1%是造血干细胞。真正要鉴定造血干细胞，最严格的做法还是对做过照射清髓处理的免疫缺陷小鼠做骨髓移植，最后能在免疫缺陷小鼠体内重建完整的免疫造血系统，才能说明移植的细胞里面有造血干细胞，不过也不能说明移植的每个细胞都是造血干细胞，除非能做单细胞移植，而这一个细胞最后能移植重建。

AIR-JPC

太宏观，理解不了；太微观，技术上又达不到，游离在宏观与微观的我，如何才能找到两者的切入点

lyj-0017

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你分选的是人的外周血或骨髓，还是小鼠骨髓？如果分选的是人的细胞的话，仅仅CD34只能分选出造血祖细胞；如果分选的是小鼠骨髓的话，年龄较小小鼠骨髓中CD34细胞可代表部分造血祖细胞，年龄较大（至少得一个月吧）的小鼠骨髓中CD34细胞不能代表造血干祖细胞，而应采用CD117标志。如wwy551 所言，现在不管分选人的还是动物的造血细胞，一般都应结合多个细胞表面标志进行深度分选，如人造血干细胞可按照Lin-CD133+CD34+分选，小鼠造血干细胞可按照Lin-Sca-1+CD117+分选。
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* y$ ^9 v) Z& u0 v7 U6 Y和人造血干/祖细胞一样，小鼠源细胞也可以通过系列特异性标志的阴性筛选进行富集，这些标志包括CD3、B220、Gr-1、Mac-1和Ter119等。 小鼠HSCs表达Sca-1（Ly-6A/E）、c-Kit和Thy-1，而红系、粒系和巨核系祖细胞只表达c-Kit，Sca-1却为阴性。去除Lin特异性细胞，结合c-Kit与Sca-1阳性筛选，是分离小鼠造血干/祖细胞的常用方法。但是，必须注意的是，不同品系的小鼠血细胞Sca-1表达量是不同的。例如，C57/BL小鼠Sca-1高表达，而BALB/c表达量很低。除利用Sca-1外，也可以用其它方法分离小鼠HSCs。 如：罗丹明123和Hoechst33342染料染色，或与麦精凝集素结合后，利用FACS筛选，或利用c-Kit进行阳性筛选等。
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0 y! b5 L( j$ J4 ^0 ^# a1 h小鼠原始造血细胞也表达CD34，但是，小鼠CD34基因表达的调节方式与人不同。一般认为，所有的小鼠胎肝源HSCs为CD34阳性，幼鼠骨髓细胞中约50%HSCs表达CD34，而成年鼠90%左右的HSCs为CD34阴性。在成年鼠骨髓c-Kit+/Sca-1+/Lin-细胞群体中，CD34-细胞细胞亚群HSCs的含量是CD34+亚群的5倍。 CD34在小鼠HSCs上的表达，不仅与造血细胞发育阶段，也与细胞的活化状态有关。 因此，即使在成年鼠造血细胞发育过程中，随着造血干/祖细胞的发育分化，CD34反而高表达。CD34常常被认为小鼠晚期造血祖细胞的标志，如定向髓系祖细胞。

jack1381818

一般再直接CFU 培養计算在显微镜下计算各型造血干细胞完整性，便是可代表是否具造血祖细胞功能與分化性
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AIR-JPC

细胞海洋

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