猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化 很多问题都不懂

倔强的投手

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6 X& j& w) ^' u. x. H我最近在做猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化，由于是第一次做，很多问题都不懂：
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1 猪脂肪干细胞一般传几代之后就不能分化了？之前听师姐说，牛的传3代就不能再分化了。由于我没有对锁获得的细胞进行鉴定，其中可能肯定含有一部分的前脂肪细胞或者其他细胞。请问这种情况下，我一般可以用第几代的细胞进行诱导分化？  ]" a. ?0 w& n& q, d

) k0 n; g* S5 n, M4 N3 J2 猪脂肪干细胞的接种密度一般是多少？我之前接种的密度是25000cells/cm2
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3 我用的诱导分化液是无血清的，还含有胰岛素、DEX、IBMX和Rosiglitazone，请问这种分化培养基可以吗？我看好多文献上面都是加血清的
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4 在诱导分化后第三天开始，我的细胞有好多都漂起来了，我用的是第三代的细胞，而且剩下的细胞液没有看见明显的脂滴，请问这是怎么回事？
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& J$ t2 V% T- O# d这是我分离得到的细胞
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  t6 Q  N! z* o! p* y/ k# P0 F这是加诱导分化液之后1d的照片6 \/ j# h1 E- y
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这是诱导分化第2d的照片5 O. R% I" G3 b

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9 W9 t. }1 v. N这是第3天的，很多细胞开始飘起来了
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liyujuanmarry

1、你养的细胞状态不怎么好
/ L0 {- z, k/ p2、可以看到你做过诱导分化后的细胞大都死了，所以会飘起来
+ h+ t' ^7 p6 Y3 T3、可以考虑更改一下培养基配方

倔强的投手

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5 ^# d: c: L1 U8 p$ ^; x
% @2 j& u5 ?. @) ^' x1 其实加诱导分化液之前还是挺好的，很快就长满了，两天之后就差不多100%融合了。是不是在80-90%左右融合的时候就可以诱导分化了？
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2 是的，我也认为很多细胞在诱导分化的过程中死亡了很多，应该怎解决这个问题呢？
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3 你说的是更改诱导分化培养基的配方？是不是加10%的FBS会比较好？

liyujuanmarry

一般情况下细胞长到100%融合的时候再处理已经晚了，细胞就很老了，可以在80-90%融合就处理。其实从你发的的第一张细胞图片就可以看出，你养的细胞状态很不好，正常情况下的脂肪干细胞应该是长梭形的，或许你在诱导之前的细胞培养液就不是很理想。

sunflower636

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5 f3 R* d' o9 Z
6 T& N& B) d" a7 B# x, x/ ^猪和人的脂肪细胞有点不一样，我都养过。猪的脂肪细胞贴壁后出来就是这个样子，不是人的那种细长的梭形，我认为这不是细胞老化。

sunflower636

回复 倔强的投手 的帖子) @# T9 q3 t  m5 R1 U$ ?! V

0 q3 {. Q3 |/ q$ U+ a' N应该是没有血清的缘故，可以把血清浓度控制得低点。2%到5%，试试。

倔强的投手

回复 liyujuanmarry 的帖子6 S* c9 p$ p! ~  J0 k8 E6 d0 n2 b

! \4 y& g: B8 N0 @1 F/ H那张不是诱导前的细胞，就是细胞生长过程中我拍的
1 p4 U4 T$ l8 @1 U1 ?$ d下面这张是诱导前拍的照片
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倔强的投手

回复 sunflower636 的帖子
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$ |' t% T9 L) i4 h, ^" Z我用的是第三代的细胞，不知道是不是有点老了，因为原代培养，本来就传不了很多代。) ~( a5 o7 p( i/ d

5 s  ^! q& t* ?3 T我也感觉可能是没有血清的缘故，本来诱导分化对洗吧就有一定的毒害作用，再加上无血清培养基中的应用成分可能也相对较少，所以才造成了细胞的大量死亡

深海鱼

为什么不加血清呢？三联诱导都是在10%血清里加的。话说你诱导人家成脂又不给营养，所以只能死给你看了

倔强的投手

回复 深海鱼 的帖子( r8 Z9 f# J% j; O  P4 k6 @

: c8 U; V8 k3 T8 {2 [好吧，下次加FBS试试