猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化 很多问题都不懂

倔强的投手

7 L/ c# s' c' f& D

* p# S% Z2 r' c& H% ~& f% c8 |: F. @我最近在做猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化，由于是第一次做，很多问题都不懂：
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) ^) W$ F" ~6 u# ]! d) D2 [1 猪脂肪干细胞一般传几代之后就不能分化了？之前听师姐说，牛的传3代就不能再分化了。由于我没有对锁获得的细胞进行鉴定，其中可能肯定含有一部分的前脂肪细胞或者其他细胞。请问这种情况下，我一般可以用第几代的细胞进行诱导分化？
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2 猪脂肪干细胞的接种密度一般是多少？我之前接种的密度是25000cells/cm2
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  V' x8 a( p: d9 I3 我用的诱导分化液是无血清的，还含有胰岛素、DEX、IBMX和Rosiglitazone，请问这种分化培养基可以吗？我看好多文献上面都是加血清的
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4 在诱导分化后第三天开始，我的细胞有好多都漂起来了，我用的是第三代的细胞，而且剩下的细胞液没有看见明显的脂滴，请问这是怎么回事？
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这是我分离得到的细胞
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这是加诱导分化液之后1d的照片% F: y7 O. N  ~# E% `/ L3 N
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这是诱导分化第2d的照片7 {( L6 E- D  Z" c% |5 n7 v  b
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这是第3天的，很多细胞开始飘起来了( V1 |/ k0 l' K% g& u

liyujuanmarry

1、你养的细胞状态不怎么好
4 ?' Z; ]2 U# m6 q5 G2、可以看到你做过诱导分化后的细胞大都死了，所以会飘起来1 ?. {0 {4 A8 j1 K1 }: g
3、可以考虑更改一下培养基配方

倔强的投手

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3 R; }7 @5 J9 y+ ~% h6 j1 V9 @$ |
2 h  ]4 ?7 I& [4 x6 R6 |1 其实加诱导分化液之前还是挺好的，很快就长满了，两天之后就差不多100%融合了。是不是在80-90%左右融合的时候就可以诱导分化了？* U5 F3 v( O) e% @5 X- |

& W, c! D3 `5 H2 E$ e5 Q2 j- w/ Y# M/ J2 是的，我也认为很多细胞在诱导分化的过程中死亡了很多，应该怎解决这个问题呢？
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3 K( [  y& {; e7 f3 你说的是更改诱导分化培养基的配方？是不是加10%的FBS会比较好？

liyujuanmarry

一般情况下细胞长到100%融合的时候再处理已经晚了，细胞就很老了，可以在80-90%融合就处理。其实从你发的的第一张细胞图片就可以看出，你养的细胞状态很不好，正常情况下的脂肪干细胞应该是长梭形的，或许你在诱导之前的细胞培养液就不是很理想。

sunflower636

回复 liyujuanmarry 的帖子9 ?# b9 l* p0 n
* _  U  m- ?" g9 ~' a6 }
猪和人的脂肪细胞有点不一样，我都养过。猪的脂肪细胞贴壁后出来就是这个样子，不是人的那种细长的梭形，我认为这不是细胞老化。

sunflower636

回复 倔强的投手 的帖子3 @& n( X" `8 w8 p# }7 [
8 Q  {2 \! C4 |( p- u1 V! ?/ y
应该是没有血清的缘故，可以把血清浓度控制得低点。2%到5%，试试。

倔强的投手

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1 r- x' L  P# v% X- l+ J! L+ h  z: r- o
那张不是诱导前的细胞，就是细胞生长过程中我拍的
$ z# n% ]% v- v2 ?0 l/ q下面这张是诱导前拍的照片; |- K0 C5 Y1 K5 R9 k

倔强的投手

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8 Y) x0 `: x/ r* I3 i* C
/ w% S+ }! e5 S* o8 d2 d% ~6 B我用的是第三代的细胞，不知道是不是有点老了，因为原代培养，本来就传不了很多代。! N/ U, ^$ |9 `  D$ J8 a8 _- V
: \% n" E' g+ W! D- R" H
我也感觉可能是没有血清的缘故，本来诱导分化对洗吧就有一定的毒害作用，再加上无血清培养基中的应用成分可能也相对较少，所以才造成了细胞的大量死亡

深海鱼

为什么不加血清呢？三联诱导都是在10%血清里加的。话说你诱导人家成脂又不给营养，所以只能死给你看了

倔强的投手

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; k# [' n1 X$ z, v* q" J好吧，下次加FBS试试