猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化 很多问题都不懂

倔强的投手

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4 \9 R8 Q" N: B: I我最近在做猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化，由于是第一次做，很多问题都不懂：
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1 猪脂肪干细胞一般传几代之后就不能分化了？之前听师姐说，牛的传3代就不能再分化了。由于我没有对锁获得的细胞进行鉴定，其中可能肯定含有一部分的前脂肪细胞或者其他细胞。请问这种情况下，我一般可以用第几代的细胞进行诱导分化？$ X8 v. |! k1 q, `& ]
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2 猪脂肪干细胞的接种密度一般是多少？我之前接种的密度是25000cells/cm2: K5 D) ^1 v0 g9 _$ n' B% e& g

& R) e& ]8 O# W1 Z3 我用的诱导分化液是无血清的，还含有胰岛素、DEX、IBMX和Rosiglitazone，请问这种分化培养基可以吗？我看好多文献上面都是加血清的/ [# r5 Y" E2 }4 e2 i! A

; z$ P7 z6 T7 n% {4 在诱导分化后第三天开始，我的细胞有好多都漂起来了，我用的是第三代的细胞，而且剩下的细胞液没有看见明显的脂滴，请问这是怎么回事？0 P0 |+ b) G" \+ c
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这是我分离得到的细胞
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这是加诱导分化液之后1d的照片, J! c% a3 l  P2 W( f
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这是诱导分化第2d的照片
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这是第3天的，很多细胞开始飘起来了7 @3 i- n: ?2 s% j/ v8 ~

liyujuanmarry

1、你养的细胞状态不怎么好/ c2 U3 e: t$ j1 E6 j3 ]
2、可以看到你做过诱导分化后的细胞大都死了，所以会飘起来
3 }" w- V' m3 ^+ ]( E" f5 H! \3、可以考虑更改一下培养基配方

倔强的投手

回复 liyujuanmarry 的帖子0 Y" a( f  Y: f

- [0 U3 k4 i5 I" V2 L1 其实加诱导分化液之前还是挺好的，很快就长满了，两天之后就差不多100%融合了。是不是在80-90%左右融合的时候就可以诱导分化了？
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" e& ]; v- w( g  r+ g3 l9 `2 是的，我也认为很多细胞在诱导分化的过程中死亡了很多，应该怎解决这个问题呢？
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1 X8 V* l% @& m0 P4 ]. y! ^3 你说的是更改诱导分化培养基的配方？是不是加10%的FBS会比较好？

liyujuanmarry

一般情况下细胞长到100%融合的时候再处理已经晚了，细胞就很老了，可以在80-90%融合就处理。其实从你发的的第一张细胞图片就可以看出，你养的细胞状态很不好，正常情况下的脂肪干细胞应该是长梭形的，或许你在诱导之前的细胞培养液就不是很理想。

sunflower636

回复 liyujuanmarry 的帖子/ i0 V: q/ _1 m; F

7 `- ~& h# V5 n5 S- z猪和人的脂肪细胞有点不一样，我都养过。猪的脂肪细胞贴壁后出来就是这个样子，不是人的那种细长的梭形，我认为这不是细胞老化。

sunflower636

回复 倔强的投手 的帖子5 q- O6 n# X+ W- F* q! r7 w- i
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应该是没有血清的缘故，可以把血清浓度控制得低点。2%到5%，试试。

倔强的投手

回复 liyujuanmarry 的帖子$ H0 y1 g' N7 v

& G( E' |$ {2 J& ^1 V0 p7 |那张不是诱导前的细胞，就是细胞生长过程中我拍的
7 U; k) _5 K* ~0 J下面这张是诱导前拍的照片. T5 S3 v$ I: j. l" L6 r

倔强的投手

回复 sunflower636 的帖子
0 `6 G% B0 Q8 a3 l0 P$ T6 e$ H
我用的是第三代的细胞，不知道是不是有点老了，因为原代培养，本来就传不了很多代。; q! ^1 }* B( L  j/ N6 g5 \. ~2 ?& O

# D$ G/ G! J+ P; L0 ?我也感觉可能是没有血清的缘故，本来诱导分化对洗吧就有一定的毒害作用，再加上无血清培养基中的应用成分可能也相对较少，所以才造成了细胞的大量死亡

深海鱼

为什么不加血清呢？三联诱导都是在10%血清里加的。话说你诱导人家成脂又不给营养，所以只能死给你看了

倔强的投手

回复 深海鱼 的帖子9 B# t& D4 O; h/ L
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好吧，下次加FBS试试