用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？

ytumuyangren

因全骨髓培养获取兔子骨髓MSC存在一定的弊端，因此在实验过程中想采用密度梯度离心的方式来分离MSC，看到有关兔子MSC分离所采用的percoll的密度梯度是1.073g/ml，查阅了一些配制1.073g/mlde percoll的资料，有不同的解释。
9 x" k. q' t9 \) f方法一：
' K5 D4 j( l0 B" `$ r& ?: N' K; m1.先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压；
  a1 b' S4 Z4 p: [. s: F2.然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度：56体积percoll：44体积NaCL或PBS。
" ]* K2 E4 \* A$ B0 t方法二：7 h7 V. d! J. l" z) n0 e3 c  _
9ml percoll原液+1ml8.5%的NaCl=工作液 * R" u  @1 f) Y
10ml工作液+7.9ml 生理盐水=1.073的percoll
* G5 u2 j3 n. L特此请教各位大侠，帮忙解决一下，不胜感激。

pengxuleo

回复 ytumuyangren 的帖子  l3 i; z. j1 Y7 |

% g/ i/ Y! m; W' A你说的挺清楚的，按照你写的配置就可以了，两个方法都可行。一般情况下都是用10XPBS配成90%的母液，然后在做梯度离心前，用1xPBS或者生理盐水或者基础培养基配到你所需要的密度，在室温下进行梯度离心。

ytumuyangren

回复 pengxuleo 的帖子0 o+ ?+ [8 W* w) R( m2 x9 h* Q

, f* _* i# w" v, y5 O嗯，谢谢pengxuleo的指点，今天试了一把，看到了传说中的雨雾层，分离后洗了一遍离心接种到T25的培养瓶中，明天看看效果，呵呵，希望能够成功。另外，我今天下了一份GE公司的percoll配制说明，讲解的还比较详细，里面有具体的公式。改天传上来给大家分享一下。

pengxuleo

回复 ytumuyangren 的帖子. i/ D# [. P, r( p1 i
  k% u$ p4 @3 n5 a3 P. v0 ~
呵呵，祝你成功

644414915

我们没分离，也养出来了，长得贼快不到两天就要传代2 l* v; L9 \9 c4 d

644414915

但是现在让小鼠间充质干细胞把我给难道了，谁要是能养出来，我真服了

ytumuyangren

回复 644414915 的帖子! F, B9 M0 o5 ~! [& j; p& _; {9 i; k

1 M8 e& X8 x. I/ T那你们养出来的细胞有没有鉴定？

ytumuyangren

最近一直忙的做实验，没有及时更新实验的最新进展，元旦前后又做了几次，都能分出单核细胞，但是分出的细胞长的太慢，呵呵，还没有达到消化传代的要求，再养养，等细胞传到p3以后再做做鉴定。

644414915

回复 ytumuyangren 的帖子
3 V1 `3 r; _- ^) A# x. b  Y' I0 O( G: c6 [1 z  ?% L3 Y5 t# w! q' z
鉴定了，因为鉴定有神经方面mark表达，然后一个老师看了后把我细胞扔掉了；后来转做小鼠了。

644414915

/ g6 B/ s" _5 P6 E7 v' K

4 D, e: q: E; A# m' a. Q回复 ytumuyangren 的帖子
/ u8 j" h' P8 w$ A$ e4 i- x$ t0 _. @& q9 r' b
关键这**吧实验简单结果居为己有，因为在人家地盘做实验所以只能低三下四的，不了了之了。