用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？

ytumuyangren

因全骨髓培养获取兔子骨髓MSC存在一定的弊端，因此在实验过程中想采用密度梯度离心的方式来分离MSC，看到有关兔子MSC分离所采用的percoll的密度梯度是1.073g/ml，查阅了一些配制1.073g/mlde percoll的资料，有不同的解释。  x% J% Z. ]( O2 m3 @) p5 p
方法一：
) v. x+ Y( Y: ~  I$ `; |1.先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压；
3 B. Q+ K3 P8 d) [2.然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度：56体积percoll：44体积NaCL或PBS。6 v. i1 q- c0 _1 }8 V& u
方法二：
- k5 Y: j3 w2 y4 ^/ g1 R9ml percoll原液+1ml8.5%的NaCl=工作液
: J$ I" A, R9 \, ?8 B1 `! O10ml工作液+7.9ml 生理盐水=1.073的percoll
/ N& y2 p) y0 l  o特此请教各位大侠，帮忙解决一下，不胜感激。

pengxuleo

回复 ytumuyangren 的帖子7 X. x0 y# f0 D( `4 n( y
4 y1 @$ H" A) m; @9 Z2 o; Q& u  Z. O
你说的挺清楚的，按照你写的配置就可以了，两个方法都可行。一般情况下都是用10XPBS配成90%的母液，然后在做梯度离心前，用1xPBS或者生理盐水或者基础培养基配到你所需要的密度，在室温下进行梯度离心。

ytumuyangren

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5 M  _" U. U: P2 t嗯，谢谢pengxuleo的指点，今天试了一把，看到了传说中的雨雾层，分离后洗了一遍离心接种到T25的培养瓶中，明天看看效果，呵呵，希望能够成功。另外，我今天下了一份GE公司的percoll配制说明，讲解的还比较详细，里面有具体的公式。改天传上来给大家分享一下。

pengxuleo

回复 ytumuyangren 的帖子4 y: A( n. ]# N  V: L
2 h3 q9 d; _* Q. l+ @) A5 c
呵呵，祝你成功

644414915

我们没分离，也养出来了，长得贼快不到两天就要传代
1 O! u4 y/ e" j9 L0 G/ M( o" X% m: l$ p

644414915

但是现在让小鼠间充质干细胞把我给难道了，谁要是能养出来，我真服了

ytumuyangren

回复 644414915 的帖子& d: V% [. d; _% O) v+ V1 V& x; n5 B

) c. P/ R8 x. h: y4 q那你们养出来的细胞有没有鉴定？

ytumuyangren

最近一直忙的做实验，没有及时更新实验的最新进展，元旦前后又做了几次，都能分出单核细胞，但是分出的细胞长的太慢，呵呵，还没有达到消化传代的要求，再养养，等细胞传到p3以后再做做鉴定。

644414915

回复 ytumuyangren 的帖子, H; V/ C0 i; N! M9 b+ D* G

  @5 p2 z6 }: h- x5 c% r, j( A鉴定了，因为鉴定有神经方面mark表达，然后一个老师看了后把我细胞扔掉了；后来转做小鼠了。

644414915

( h) u  N" l/ j7 i3 u; ?3 r1 m9 |7 M$ N: R
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* D7 \3 w# J% s5 t$ M% D# _+ E1 W( }2 \3 d3 p8 x3 x
关键这**吧实验简单结果居为己有，因为在人家地盘做实验所以只能低三下四的，不了了之了。