病毒感染细胞问题

huangcong1988

收集病毒以后，用100KD浓缩柱子浓缩，大概能浓缩10~15倍，一般就是15ml病毒上清能浓缩到1~1.5ml，浓缩后的病毒感染成纤维细胞发现，在4×的荧光视野下完全看不到荧光，但在10×视野下能看到微弱荧光，我是用的六孔板，一个孔里面加300μl浓缩后的病毒夜，为什么感染效率这么低？我还加了polybrene，浓度为10μg每ml。病毒滴度应该不很低啊，因为当时收集完病毒之后，照过荧光，很亮。感染过293T，也还是比较亮。为什么感染成纤维就不亮呢？

yueweilei

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: A" f% H+ q3 X: ^9 ~2 [6 U$ N9 |不是感染成纤维细胞吗？怎么会有feeder啊？我的是加病毒没几天，细胞形态就发生变化了。但是成为克隆要十几天！

huangcong1988

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+ y$ Y; N( ^( W2 {0 S; w) n! p0 \& G  L4 I5 @! |
您是二十几天以后才出现colony是吧？那之前细胞形态那些有没有一些变化呢？就是细胞出现聚集的情况？我发现孔板周围的细胞，可能是feeder已经出现脱落了，怎么办呢？

varing

回复 spongezhao 的帖子) v1 {7 n1 E9 J" _8 `

5 }5 M! V# I' Q! |+ ~( x是的 MEF可以铺稀少点 因为多次感染过程中细胞还会长一些的 多次感染会有细胞死亡 我发现有的地方是成片死亡 就一块地方 细胞裂解一样 好的地方和死亡的地方 界限分明

细胞海洋

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) L& w2 Z+ ]( n' x/ ~3 h5 ~' e- R1 |  v; s, i
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yueweilei

回复 huangcong1988 的帖子, v* D% m# v4 C" L9 J1 f

  P- ]1 X2 p* t7 |& u% G8 m加了。细胞没死。12孔板！total 2ml。其它的你自己摸下条件吧！

spongezhao

回复 varing 的帖子1 M9 U# D( E( w/ t! X1 b

" @& W& t' U, `9 e0 q请问是MEF铺稀点吗？如果是的话密度铺多少呢？感染多次会不会造成细胞的大量死亡呢？

huangcong1988

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, m9 ]. a! @4 _
. q% t; x2 V7 B6 T" @- _直接用10cm dish包毒，然后病毒液不浓缩，收集的病毒液直接感染MEF，6孔板，每个孔2ml病毒上清是吧？这样细胞不会死亡吗？应该会大量死亡吧？还有一个问题，加了polybrene没？

yueweilei

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) K2 [. \/ O5 `' I: ~
( v2 }8 y1 T, h2ml/孔

huangcong1988

回复 yueweilei 的帖子+ W; ?# }9 W( p. B3 Q, R6 p
' x. g) Q9 g& ~2 P4 |8 F8 U$ D- q! L
我知道，那你包完毒以后，加入到感染细胞中，总有一定体积吧？