病毒感染细胞问题

huangcong1988

收集病毒以后，用100KD浓缩柱子浓缩，大概能浓缩10~15倍，一般就是15ml病毒上清能浓缩到1~1.5ml，浓缩后的病毒感染成纤维细胞发现，在4×的荧光视野下完全看不到荧光，但在10×视野下能看到微弱荧光，我是用的六孔板，一个孔里面加300μl浓缩后的病毒夜，为什么感染效率这么低？我还加了polybrene，浓度为10μg每ml。病毒滴度应该不很低啊，因为当时收集完病毒之后，照过荧光，很亮。感染过293T，也还是比较亮。为什么感染成纤维就不亮呢？

huangcong1988

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/ f2 D3 U& }" g0 @8 c# e, j/ R2 k滴度不够的话，浓缩了啊，用浓缩柱浓缩了，浓缩后的病毒，加的量还不少，再感染，结果也还是不好

huangcong1988

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, ^: N9 V& ^5 N, Z8 R恩，是的，慢病毒

huangcong1988

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逆转录病毒系统我也有一套，不过逆转录病毒的没带荧光，只有一个control。我用柱子浓缩，你逆转录病毒感染效果怎么样呢？

huangcong1988

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多久形成colony？还有你病毒加入量是多少？

huangcong1988

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我知道，那你包完毒以后，加入到感染细胞中，总有一定体积吧？

huangcong1988

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直接用10cm dish包毒，然后病毒液不浓缩，收集的病毒液直接感染MEF，6孔板，每个孔2ml病毒上清是吧？这样细胞不会死亡吗？应该会大量死亡吧？还有一个问题，加了polybrene没？

huangcong1988

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您是二十几天以后才出现colony是吧？那之前细胞形态那些有没有一些变化呢？就是细胞出现聚集的情况？我发现孔板周围的细胞，可能是feeder已经出现脱落了，怎么办呢？