病毒感染细胞问题

huangcong1988

收集病毒以后，用100KD浓缩柱子浓缩，大概能浓缩10~15倍，一般就是15ml病毒上清能浓缩到1~1.5ml，浓缩后的病毒感染成纤维细胞发现，在4×的荧光视野下完全看不到荧光，但在10×视野下能看到微弱荧光，我是用的六孔板，一个孔里面加300μl浓缩后的病毒夜，为什么感染效率这么低？我还加了polybrene，浓度为10μg每ml。病毒滴度应该不很低啊，因为当时收集完病毒之后，照过荧光，很亮。感染过293T，也还是比较亮。为什么感染成纤维就不亮呢？

varing

感染原代细胞本来就比较难。我现在也是这个问题，48小时后在20×的视野下才能看到荧光，293太容易感染了。我的没浓缩，很大的原因是病毒滴度不够，也可能是MEF状态不好。我打算把细胞铺稀点，然后多次感染来克服。

yueweilei

呃，想问下用的什么病毒啊？用来做iPS？
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huangcong1988

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2 }' e' M0 q9 l8 ?* n7 z/ o* @2 S) I4 ?* Y. ?3 j
滴度不够的话，浓缩了啊，用浓缩柱浓缩了，浓缩后的病毒，加的量还不少，再感染，结果也还是不好

huangcong1988

回复 yueweilei 的帖子& Q7 V+ Y5 t  D+ u' d  u$ o
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恩，是的，慢病毒

yueweilei

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( X4 c+ s  b1 W) @* i" l0 m! O; X) x; `' T8 D, t
哦。我们用的逆转录病毒。不过，慢病毒好像可以通过高速离心1h-2h，进行浓缩。

huangcong1988

回复 yueweilei 的帖子" f7 E( ]5 }4 e8 K; b. N, G

7 e6 [" `4 c4 y( q逆转录病毒系统我也有一套，不过逆转录病毒的没带荧光，只有一个control。我用柱子浓缩，你逆转录病毒感染效果怎么样呢？

yueweilei

回复 huangcong1988 的帖子9 p$ m+ }9 g. A0 a- B* U

/ Z+ O  |) y/ P# m2 h& W5 B我用12孔板做，每个孔一般能有二十个左右的ips克隆形成，应该还行吧！

huangcong1988

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多久形成colony？还有你病毒加入量是多少？

yueweilei

回复 huangcong1988 的帖子* A: s3 T+ s. g1 k1 x+ C
+ F2 h( g  O" w/ c$ c3 E/ g6 b
没测滴度啊，不知道具体是多少。四因子的话大概十几天吧。