外周血CIK培养--死亡

莫邪小仙

最近做了两次外周血的CIK，每次都是刚开始几天出现大的集落，然后不到一周的时间细胞就开始死亡，视野内全是各种碎片及没有光泽的黑暗的小个细胞，有的还不是细胞，不知道是什么原因。坛子里有没有遇到过这种情况，因为以前同样的方案养脐带血来源的CIK效果很好，不知道外周血的是怎么回事。大家帮忙分析一下，谢谢。

流泪的鱼

第三天开始要补充培养基和细胞因子，你补充了吗？二氧化碳是新换的吗？水池里是否有水？细胞因子是新批次吗？培养基的种类？和以前的完全一样吗？病人的血液做了化验了吗？是同一批次的培养皿和培养袋吗？诸多问题要一一排除。

gengtongyu521

我做外周血的时候 细胞经常会成团，大片大片的团，单个细胞很少，每天做实验前要晃一晃培养液，使细胞分散开，充分接触到营养，并适当补充培养基。

莫邪小仙

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: s* s& p/ }6 C. B所有的条件都和脐血的一样，按时补加培养液和细胞因子，甚至脐血和外周血同时做的时候也是外周血的长的不好，就出现这种情况，而脐血的长的很好。用的外周血不是病人的，是抽的我们自己的血液，健康身体的。想问下，外周血和脐血的培养方案是不是不太一样？还是因子的量问题？

莫邪小仙

回复 gengtongyu521 的帖子4 @6 D$ C2 V5 r% R5 j
& k0 o4 L' n9 S
嗯 是的，聚团现象很严重，但是到后期就会消失都是单个的细胞了。想问阁下你们的细胞因子是怎么加的，第一次是加IL-1、IL-2和CD3吧，以后每次换液的时候只补加IL-2吗？因子用量是1000U吗？

xu_shufen

cik细胞培养是指多种细胞因子激活淋巴细胞，使细胞活化、增殖。血液中的其它非淋巴细胞在大约4-5天时逐渐死亡。培养14天以后死亡的细胞被吞噬。所以培养时细胞浓度非常重要，浓度太低细胞长的慢，死细胞多，这样死细胞的代谢物质影响细胞生长。另外，自体CIK细胞个体差异很大，对于高血压、糖尿病病人CIK细胞不易培养，要极时观察加入细胞因子、血清等物质。

gengtongyu521

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+ e6 h, A! Q* w3 U7 \: ?7 v/ S第一天先加IFN-r的。第二天再加那三种

kiss2346

你可以做一下无菌检测，还有我个人感觉脐带血的体系养外周血问题不大，最多就是增值速率有些诧异，但是你这个情况真说不准

sunny.yc

培养基的颜色正常吗？有可能是培养箱CO2的浓度，这种问题我遇到过

莫邪小仙

回复 sunny.yc 的帖子! Q! B1 A- O7 |

  y( Q; E* x5 l; |) Q是正常的，条件都是正常的，一起培养的脐血的CIK也很好，就是外周血的长的不行。请问你们是怎么解决这个问题的？